«Рязанский государственный медицинский университет имени академика И.П. Павлова» жидкостях: методические рекомендации [Текст] / М.А. Фомина, Ю.В. Абаленихина ГБОУ ВПО РязГМУ Минздрава.


Чтобы посмотреть этот PDF файл с форматированием и разметкой, скачайте его и откройте на своем компьютере.












Направахрукописи





АБАЛЕНИХИНАЮЛИЯВЛАДИМИРОВНА


ОКИСЛИТЕЛЬНАЯМОДИФИ
КАЦИЯБЕЛКОВИ
ЛИЗОСОМАЛЬНЫЙЦИСТЕИ
НОВЫЙПРОТЕОЛИЗ
ИММУНОКОМПЕТЕНТНЫХО
РГАНОВКРЫСВУСЛОВИ
ЯХ
МОДУЛИРОВАНИЯСИНТЕЗ
АОКСИДААЗОТА



03.01.04
±

Биохимия


АВТОРЕФЕРАТ

диссертациинасоисканиестепени

кандидатабиологическихнаук




Рязань
-

2015

3


1.

Общаяхарактеристикаработы

1.1.

Актуальностьтемы

Белкивсилуособенностейсвоегостроенияявляютсяоднойизосновных
ловушекактивныхформкислородаиазотаобразующихсяподдействием
ионизирующейрадиациифотохимическихвоздействий
атакжевпроцессе
металл
-
зависимогоокисленияилирядаокислительно
-
восстановительныхреакций
ферментативнойинеферментативнойприроды ДубининаЕЕ Продуктом
токсическогодействиясвободныхрадикаловиактивныхформкислородаазота
являютсям
одифицированныебелкикоторыепредставляютсобойодиниз
мощныхэлементовклеточнойсигнализациииодновременноактивно
используютсядляхарактеристикиокислительногостресса ýRODN( Всилу
широкойприроднойраспространенностибелковистабиль
ностипродуктових
окисленияоценкаокислительноймодификациивчастностикарбонилирования
протеиновсчитаетсянадежныммаркеромоксидативногоповреждения Дубинина
ЕЕМуравлеваЛЕидр Возможностьрегистрациисодержания
окисленных

белковкаквбиологическихжидкостяхтакивтканяхпривелак
накоплениюзначительногофактическогоматериалакоторыйдемонстрирует
изменениеуровнякарбонильныхпроизводныхприрядепатологических
состояний ИсмаиловаЖГДубининаЕЕПуст
ыгинаАВ
*ULPVUXG3$HWDOБелоноговРНидрНикитинаЮВМухина
ИВТолочкоЗССпиридоновВКВедуноваМВСазановАИ
КонторщиковаКНИвановВВидр Однаковнастоящеевремя
отсут
ствуетединыйметодологическийподходктрактовкерезультатовчто
затрудняетанализполученныхданных

Впоследниегодывкачествеодногоизагентовоксидативногостресса
рассматриваетсяэндогеннопродуцируемыйоксидазота ГраникВГГригорьев
НБ
&DODEUHVH9HWDO Наблюдающеесявнастоящеевремя
экспоненциальноенарастаниеисследованийвобластибиологииоксидаазота
привелокобнаружениюмножественностиегоэффектов 7KLSSHVZDP\7HWDO
 демонстрирующихкактоксическое 6]D
E}&,VFKLURSRXORV+5DGL5
6HQHU$HWDO такизащитное +XPPHO6*HWDO2]oXEXNoX6
(UJ•Q1,OKDQ( действиеэтой©универсальнойªмолекулыПриэтом
систематическиеисследованиявзаимоотношенийстимуляциииинг
ибирования
синтеза12сформированиемкарбонильныхпроизводныхнепроводились

Известночтомодифицированныеформыпротеиновболееподвержены
действиюпротеиназчемихнативныеаналоги ПлешаковаОВЛущак
ВИДубинина

ЕЕПустыгина

АВ
 Сдругойстороныклеточные
протеиназымогутстатьвозможнымимишенямидляповреждающегодействия
свободныхрадикаловчтосвойственнодругимферментам *ULPVUXG3$HWDO
2008).

Важнымобъектомисследованиймеханизмовответатканейна
окисли
тельноеповреждениеявляетсяиммуннаясистемадлякоторойхарактерно
наличиеспособностикгибкомуреагированиюнавнешниевоздействияс
одновременнымжесткимподдержаниемсобственногогомеостаза ЗахаровАА
4


 Наданныймоментдоказаноучастиевф
ормированиииммунногоответа
лизосомальныхцистеиновыхпротеиназ =KDQJ7HWDO.XHVWHU'HWDO
2005; Zavasnik
-
Bergant T., Turk B., 2007; Conus S., Hans
-
Uwe Simon, 2010; Watts
& иоксидаазота %RJGDQ&K,EL]D66HUUDGRU-0
, 2008; Pavanelli
:51RJXHLUD6LOYD--'DYLG$:LQNHWDO6LQJK$. в
качестверегуляторовОднакокарбонильныйстатусиммуннокомпетентных
тканейвусловияхизмененияпродукцииоксидаазотанеописан

Такимобразомпредставля
етсяактуальнымисследованиевлияни
я

измененияуровнясинтезаоксидаазотанапроцессыокислительногоповреждения
ираспадабелков

1.2.

Цельио
сновныезадачиисследования


Целью

настоящейработыявляетсяизучени
е

влиянияконкурентного
ингибитораисубстратасинтезаоксидаазотанасостояниеокислительной
модификациибелковилизосомальногоцистеиновогопротеолизатимусаи
селезенкикрыс
in vivo

и
in vitro
.

Задачиисследования

Провестикомплекснуюоценкусодерж
анияпродуктовокислительной
модификациибелковвтимусеиселезенкекрысвусловияхизменениясинтеза
оксидаазота
II
).

Описатьизмененияактивностилизосомальныхцистеиновыхкатепсинов
В
L

иНвизучаемыхмоделяхсоценкойингибиторноговлиянияи
аутокаталитическогопроцессинга

Проанализироватьзависимостьсостояниялизосомальногоцистеинового
протеолизаотстепениокислительноймодификациибелков


1.3.

Научнаяновизна


Впервыепредставленспособкомплекснойоценкисодержанияпродуктов
окислительноймодификациибелковвтканяхибиологическихжидкостях
позволившийобнаружитьувеличениеобщегосодержаниякарбонилированных
белковвусловиях
in
vivo
-

и
in vitro
-
ингибировани
ясинтезаоксидаазота
Установленонарастаниедоливторичныхмаркеровокислительногострессаи
истощениерезервно
-
адаптационногопотенциалаподдействиемконкурентного
ингибиторасинтезаоксидаазотаВпервыедоказаночтовоздействие1
-
нитро
-
L
-
аргининмет
иловогоэфира

(
L
-
NAME
)

приводиткповышениюактивности
лизосомальныхцистеиновыхпротеиназ

втимусеиселезенкепреимущественно
засчетвнелизосомальнойфракции

Показаночтосубстрат12
-
синтазы
-

L
-
аргининприизолированном
применениинеоказываетвлиян
иянаокислительнуюмодификациюбелкови
состояниелизосомальногопротеолизаиммунокомпетентныхоргановкрыс
.
Применение/
-
аргинина
вусловияхдефицитасинтезаоксидаазота
оказывает
корригирующеедействие

насостояниекарбониловогостатусаи
способствует
сохранениюэффекта/
-
1$0(дляактивностилизосомальныхцистеиновых
протеиназ

5


Впервыедоказановлияниеизмененияуровняоксидаазотана
аутопроцессингкатепсиновВ/иНпридефицитесинтеза12
±

преобладает
доляактивныхмолекулпримоделированииизбыт
касинтеза12
±

преобладает
доляпроэнзимов
Показаночтоц
истатинСневноситсущественноговкладав
регуляциюактивностикатепсиновВ/иНвусловияхизмененияуровнясинтеза
оксидаазота

Впервыебылавыявленаположительнаякорреляционнаявзаимосвяз
ьмежду
увеличениемколичествакарбонильныхпроизводныхбелковиактивностью
катепсинов/иНселезенки


1.4.

Теоретическаяип
рактическаязначимостьработы


Работаноситпреимущественнофундаментальныйхарактер
представленныевдиссертацииэкспериментальныеданныепозволяютпонять
рольсубстрата /
-
аргинин иингибитора /
-
1$0( синтезаоксидаазотав
процессахмодификациибелковыхмолекулвсовокупностисиз
менением
активностилизосомальныхпротеиназчтоможетбытьиспользованодля
выяснениявозможныхпутейутилизациикарбонильныхпроизводныхбелков

П
атент©Способкомплекснойоценкисодержанияпродуктовокислительной
модификациибелковвтканяхибиологичес
кихжидкостяхª ФоминаМА
АбаленихинаЮВФоминаНВТерентьевААприоритетот может
бытьиспользованвобластиклиническойифундаментальнойбиохимиисцелью
определениястепенивыраженностиистадииокислительногостресса
источнико
вобразовавшихсякарбониловинаправленностивозможных
патологическихпоследствийпринакопленииокисленныхбелков


1.5.

Положениявыносимыеназащиту


1.
Внутрибрюшинноевведение/
-
1$0(вдоземгкгимгкгспособствует
окислительномукарбонилировани
юбелковиммунокомпетентныхоргановкрыс
in
vivo

и
in vitro
Пероральноевведение/
-
аргининавдоземгкгспособствует
снижениюуровнякарбонильныхпроизводных

2.
Моделированиедефицитасинтезаоксидаазотаспособствуетповышению
активностилизосомал
ьныхцистеиновых
протеиназвтимусеиселезенкевтом
числезасчетувеличениядолизрелыхформ

3.
Моделированиедополнительногосинтезаоксидаазотаневлияетнаактивность
лизосомальныхцистеиновыхпротеиназоднаковлияетнааутопроцессинг
катепсинов

4.
Применение/
-
аргининавусловияхдефицитасинтезаоксидаазотакорригирует
состояниекарбониловогостатусаприэтомдляизмененийактивности
лизосомальныхцистеиновыхпротеиназсохраняетсяэффект/
-
NAME.

5.
Междупроцессомокислительноймодификациибелковиактивностью
лизосомальныхцистеиновыхпротеиназ/иНвыявленаположительная
корреляционнаясвязьвусловияхмоделированиядефицитасинтезаоксидаазота


6


1.6.

Степеньдостоверностииа
пробацияработы

Достоверностьрезультатовработыподтверждаетсякорректным
использованиемтеоретическихиэкспериментальныхметодовобоснования
полученныхрезультатовивыводовДостоверностьэкспериментальныхданных
обеспечиваетсяиспользованиемсовременныхсредствимет
одикпроведения
исследованийПоложениятеорииосновываютсянаизвестныхдостижениях
фундаментальныхиприкладныхнаучныхдисциплинсопряженныхспредметом
исследованиядиссертации

Резу
льтатыисследованиядоложенына

научно
-
практическойконференции
моло
дыхученых©Аспирантскиечтенияª Рязань Х,,региональной
научно
-
практическойконференциисмеждународнымучастием©Обменвеществ
приадаптациииповрежденииª Ростов
-
на
-
Дону Х,Хмежгородской
конференциимолодыхученых©Актуальныепроб
лемыпатофизиологииª Санкт
-
Петербург 
М
еждународномсимпозиумепосвященном
-
летию
кафедрыбиохимииКазанскогоуниверситета©Биохимия
±

основанаукожизниª
Казань 
М
еждународнойнаучно
-
практическойконференции©Актуальные
вопросыразвит
иянаукиª У
фа
 Хюбилейноймеждународной
конференции©Окислительныйстрессисвободнорадикальныепатологииª
ПицундаАбхазия 
М
ежрегиональнойнаучнойконференцииуниверситета
смеждународнымучастием Рязань 
В
торойрегиональнойконф
еренции
молодыхученых©ПутиинновационногоразвитияэкономикиРязанскойобластиª
Рязань 


1.7.

Публикации

Потемедиссертацииопубликовано
7

печатныхработизних
±

в
журналахрекомендованныхВАКРФпатентнаизобретениеи

методические
реком
ендации

1.8.

Личныйвкладсоискателя

Всеизложенныевдиссертациирезультатыполученыавтором
самостоятельноилиприегонепосредственномучастииПостановказадач
интерпретацияполученныхрезультатовосуществлялисьсовместноснаучным
руководителемидругими

соавторамипубликаций

1.9.

Объёмиструктурадиссертации


Диссертационнаяработасостоитизвведенияобзоралитературы
материаловиметодовисследованиярезультатовисследованиязаключенияи
выводовСписоклитературысодержитисточниковизних
российскихи
зарубежныхОбъемработысоставляетстраницымашинописноготекста
содержитрисункови
5

таблиц




7


2.

МАТЕРИАЛЫИМЕТОДЫИССЛЕДОВАНИЙ

2.1.

Экспериментальныеживотные


Работавыполненанаконвенциональныхполовозрелыхкрысах
-
самцах
лини
и:LVWDUмассой
-
граммовЖивотныесодержалисьпо
-
особи
одногополавметаллическихклеткахплощадьюдм
2

приестественном
освещенииполучаливодуиполноценныйсухойкомбикормдлялабораторных
животных©Чараª производствоЗАО©Ассортимент
±

АгроªМосковская
областьСергиев
-
ПосадскийрайондТураково Приготовлениекормовдля
животныхрасчетрационао
существлялсясотрудникамививариявсоответствиис
установленныминормами
Наоснованииэтическойэкспертизыпланируемыхв
диссертационнойработеисследованийналабораторныхживотныхлокальн
ым

этическ
им

комитет
ом

ГБОУВПОРязГМУМинздрава
России
принято
п
оложительноезаключение протокол№от
г
).



2.2.

Экспериментальныемодели

Длямоделированиядефицитасинтезаоксидаазотаосуществляли
внутрибрюшинноевведение
раствора
неселективногоингибитора12
-
синтазы1
-
нитро
-
L
-
аргининметиловогоэфира /
-
NAM
(©6LJPDªСША

нарастворе
1D&Oвдозе

мгкг

(
Покровский

МВ
, 2008).

Препаратвводилсяразвсуткив
утренниечасыежедневновтечениеднейВыведениеизэксперимента
осуществлял
ось

на
-
есутки

Моделированиеизмененияуровнясинтезаоксида

азота ,, субстратом12
-
синтазыосуществлялипутемвнутрижелудочноговведенияраствора/
-
аргинина
©6LJPDªСША нарастворе1D&Oвдоземгкг

(
Дорохина

ЛВЗинчук

ВВ
, 2000).
Препаратвводилиразвсуткидоутреннегокормленияежедневно
в
течениеднейВыведениеизэкспериментаосуществлялина
-
есутки

Дляизучениякорригирующегодействия/
-
аргининаосуществляли
внутрибрюшинноевведе
ние/
-
1$0(вуказанныхдозахс
4
-
х

по
-
есуткина
фонепероральноговведения/
-
аргининаЖивотныхвыводилиизэксперимента
на
-
есутки

Контрольныегруппыформировалисьдлякаждойсерииэкспериментаиз
животныхсопоставимыхповозрасту
полу
массеиусловиямсодержанияс
эксперимент
альнымиособямиЖивотнымконтрольнойгруппыосуществляли
введениефизиологическогораствораприэтомвариантвведенияобъемы
раствораипродолжительностьвоздействиясовпадаютстаковы
мидля
экспериментальнойгруппы
.

Длямоделированиядефицитасинтеза
оксидаазота ,, 
in vitro

производили
инкубациюсвежевыделенныхтимоцитовиспленоцитоввполнойпитательной
средесодержащеймМ/
-
NAME
(
Стариков

ЮВ
, 2008
)

втечениечасовпри
температуре
0
С

Длямоделированияизмененияуровнясинтезаоксидаазо
та ,, 
in vitro

производилиинкубациютимоцитовиспленоцитоввполнойпитательнойсреде
содержащеймМ/
-
аргинин

(
Стариков

ЮВ
, 2008
)
втечениечасовпри
температуре
0
С

8


Контрольныегруппыформировалисьдлякаждойсерииэкспериментаиз
тимоцитов
испленоцитовинкубированныхпараллельноопытнымпробамв
полнойпитательнойсредевтечениечасовпритемпературе
0
С


2.3.

Определениеконцентрацииметаболитовоксидаазота

Содержаниеметаболитовоксидаазотаопределяливнеседиментируемой
фракции
гомогенатаспектрофотометриейввидимойобластиспектрапореакции
среактивомГрисса
(
Метельская

ВАГуманова

НГ
, 2005)
.

Уровеньметаболитов
оксидаазота суммарнуюконцентрациюнитратовинитритов
NO
х
)

определяли
спектрофотометрическимметодомпоокр
аскевреакциидиазотирования
нитритомсульфаниламидавходящеговсоставреактиваГриссаИнтенсивность
окраскиопределяливвидимойобластиспектрасрегистрациейна
микропланшетноманализаторе6WDW)D[ $ZDUHQHVV7HFKQRORJ\США при
дл
иневолны

нмивыражаливнм
ольмгбелка


2.4.

Методопределениясодержаниябелка

Содержаниебелкаопределяливседиментируемойинеседиментируемой

фракцияхгомогенатапометодуЛоурикоммерческимнаборомНПЦ©Эко
-
сервисª Санкт
-
Петербург 


2.5.

Методопределениякислойф
осфатазы

Активностькислойфосфатазыопределяливседиментируемойи
неседиментируемойфракцияхгомогенатаунифицированнымметодомпо
©конечнойточкеªиспользуякоммерческийнабор©ВиталДиагностиксСПбª
Санкт
-
Петербург 

Количествообразовавшегосяведин
ицувремени
n
-
нитрофенолапропорциональноеактивностиферментаопределяетсяпо
оптическойплотностиобразцапринм


2.6.

Методопределенияактивностилизосомальныхцистеиновыхпротеиназ

АктивностькатепсиновВ
L

иНизучаласьспектрофлуориметрическим

методом
System

3

Scanning

Spectrofluorometr
,
Optical

technology

devices
,
NewYork
)
по

Barrett
&
Kirschke

(
Barrett

A
.
J
.,
Kirschke

H
.
, 1981
).

Удельную
активностькатепсиноввтимусеиселезенкевыражаливнмольами
д
о
-
метилкумаринасек
гбелка


2.7.

Методопределениестепениаутокаталитическогодействиякатепсинов

Длявыявленияаутокаталитическогодействиякатепсинов
,

реакционную
смесьвключающуюмМДТТмМЭДТАимлисследуемогоматериала
преинкубироваливтечениеминутпри
0

СПосле
этогокнейдобавляли
мкМ

-
CBZ
-
Arg
-
Arg
-
7
-
amido
-
4
-
methylcoumarin

длякатепсинаВ
N
-
CBZ
-
Phe
-
Arg
-
7
-
амидо
-
4
-
метилкумаринадлякатепсина
L

и
Arg
-
7
-
amido
-
4
-
methylcoumarin

длякатепсинаНиинкубировалиминутпри
0
C

Борискина
МА
, 1996)
.
Аутокаталитическоедействиекатепсиновоценивалосьпокоэффициенту
отношениязначенияактивностиферментапослепрекаталитическойинкубациик
9


параллельноопределяемомузначениюактивностибезпреинкубации
K
aca
±

коэффициентаутокаталитическогодействия 


2.8.

Методоценкиокислительноймодификациибелковвтканях

Дляоценкиокислительноймодификациибелковиспользовалиопределение
уровнякарбонильныхпроизводныхпо

методу

R
.
L
.
Levine

вмодификацииЕЕ
Дубининой
ДубининаЕЕ
идр
, 1995
).

Методоценки
окислительной
модификациибелковоснованнареакциивзаимодействиякарбонильных
производныхокисленныхаминокислотныхостатковбелк
овс
-
динитрофенилгидразином
(2,4
-
ДНФГ

собразованием
-
динитрофенилгидразоновкоторыерегистрировалисьспектрофотомет
рически

По
полученнымрезультатамподсчитывали
площадьподкривойспектрапоглощения

продуктов

окислительноймодификациибелков
,

которая
складывалась

из

площадейподкривой
альдегид
-
динитрофенилгидразонов АДНФГ икетон
-
динитрофенилгидразонов КДНФГ

Па
т

РФМПК
G
01
N
Способ
комплекснойоценкисодержанияпродуктовокислительноймодификациибелков
втканяхибиологи
ческихжидкостяхФоминаМА
идрРязгосмедун
-
тим
ИППавлова
±

заявлопубл
.07.201
Бюл№
±

с 
Далееполученноезначениевыражаливусловныхединицахграммбелка


2.9.

Способоценкидолипервичныхивторичныхмаркеров

окислительногостресса

Дляоценкидолипервичныхмарк
еровподсчитываласьсуммаАДНФГ
для

оценкивторичных
-

суммаКДНФГисоотносилась

с

общ
им

содержани
ем

карбонильныхпроизводныхбелков
S
общ
).


2.10.

Способоценкирезервно
-
адаптационногопотенциала

Оценкарезервно
-
адаптационногопотенциалапроизводиласьпутем
подсчетаотношенияплощадиподкривойкарбонильныхпроизводныхбелковпри
спонтанномокислениипротеиновкиндуцированномупореакцииФентона
принимаяКДНФГ
инд
иАДНФГ
инд
за
(
Никитина

ЮВМухина

ИВ
.
, 2009)
.


2.11.

Статистическаяобработкаданных

Статистическийанализре
зультатовисследованияпроведен
с
использованиемпрограммы©0LFURVRIW2IILFH([FHOªи©6WDWLVWLFD

ª
Проверкунормальностираспределенияданныхосуществлялиспомощью
критерияШапиро
-
Уилка :
-
критерий 
Р
езультатыпредст
авляливформатеМе
>PLQPD[@где
Ме
-

медиан
а
, min
-

минимальноеиPD[

-

максимальное
значение
Д
ляоценкистатистическойзнач
имостиразличийнезависимыхвыборок
использовалиранговыйкритерийМанна
-
Уитни
U
-
тест 
Дляпроверкиравенства
медианнесколькихвыборокиспользоваликритерийКраскела
-
Уоллиса

Для
оценкиранговойкорреляциииспользоваликоэффициентСпирмена

Критический
уровеньзначимостинулевойстатистическойгипотезы р принималиравны
м

0,05.


10


3.

Результатыиобсуждение


3.1.

Х
арактеристик
аэкспериментальныхмоделей

Дляподтвержденияэффектаконкурентногоингибитораисубстрата
NO
-
синтазы

осуществлялиизмерениеуровняметаболитовоксидаазота табл 














Таблица
1

Концентрацияметаболитовоксидаазота

в

тимус
е

иселезенк
е

крысв
моделях
in

vivo
Ме
[
min
;
max
]

экспериментальнаямодель

тимус

селезенка

контроль

16,9 [10,9;
23,6]

10,6 [9,0; 18,9]

L
-
NAME
мгкг

15,2 [11,7; 19,9]

8,3 [6,6; 9,1]
* (p=0,019)

контроль

17,9 [9,1; 31,5]

12,9 [10,5; 20,7]

L
-
аргинин мгкг

>@ р 

21,1[15,1;27,2]
*
р 

контроль

15,8 [11,7; 24,9]

9,8 [8,5; 19,1]

L
-
1$0( мгкг 

L
-
аргинин мгкг

13,2 [9,8; 34,6]
^

р 

12,1 [9,4; 14,2]
^

p=0,008


Примечание
: *
-

статистическизначимыеотличияотносительногруппыконтроля


^
-

статистическизначимыеотличияотносительногруппы
L
-
аргинин


Вусловиях
in

vitr
о
-
моделированиядефицитасинтезаоксидаазота
концентрация
NO
2
̄

и
NO
3
̄

втимоцитахиспленоцитахснижаетсяапри
дополнительномвнесениисубстратавпитательнуюсреду
±

повышается табл 


Таблица
2

Концентрацияметаболитовоксида
азота нмольмгбелка втимоцитахи
спленоцитахкрысвусловиях
in

vitro
-
моду
лированиясинтезаоксидаазота

экспериментальнаямодель

тимоциты

спленоциты

Контроль

24,9
[
20,4; 32,7
]

6,11
[
5,7; 8,81
]

L
-
аргинин мМ

40,0
[
35,1; 42,1
]
*
(
p
=0,01)

32,7
[
24,9;3
8,9
]
*
(
p
=0,01)

L
-
NAME (5
мМ
)

15,4
[
12,7; 17,3
]
*
(
p
=0,03)

4,9
[
4,3; 5,7
]
*

(
p
=0,04)


Примечание
: *
-

статистическизначимыеотличияотносительногруппыконтроля


Жизнеспособностьсвежевыд
еленыхтимоцитовсоставила“
2,8 %,
послеинкубациижизнеспособностьконтрольнойгруппытимоцитов
незначите
льноснизиласьисталаравна“
 S  При
in vitro
-
моделированиидополнительногосинтезаоксидаазотасубстратом/
-
аргинин
данныйпоказательстатистическизначимоне
изменилсяисоставил“
S  однакодобавлениемМ/
-
1$0(винкубационнуюсредуспособствует
уменьшениюжизнеспособностиклетокпосравнениюсосвежевыделенными
клеткамииинкубированнымконтролем
-

“ р  

Длясвежевыделенных

спленоцитовжизнеспособностьклетоксоставила
“послеинкубациивполнойпитательнойсреденезначительно
снизилсядо“ S  Добавлениеаргининавпитательнуюсредуне
способствуетизменениюжизнеспособностиклеток
±

“
S  а
внесение/
-
1$0(мМприводиткстатистическизначимомууменьшению
жизнеспособности
±

“ S  

11



3.2
.

Оценкасостоянияо
кислительноймодификациибелков

Характеристикаокислительногокарбонилированиябелковпод
действиемконку
рентногоингибиторасинтезаоксидаазота
±

L
-
NAME

Внутрибрюшинноевведение
L
-
NAME

приводиткстатистическизначимому
увеличениюобщейплощади
под
кривой

спектрапоглощенияпродуктов

окислительноймодификациибелковселезенкикрысзасчетстатистически
значимого
повышенияколичестваальдегид
-

икетон
-
динитрофенилгидразонов
основногохарактера

придоземгкг
(
рис
)
.



Примечание
: *
-

статистическизначимыеотличияотносительноконтроля р


0,05)

Рис

1
.

Сравнительныйанализспектрапоглощенияпродуктов
окислительноймодификациибелковселезенкиподдействием
L
-
NAME

вдозе
мгкг


Обнаруженные
in

vivo

измененияподтверждаютсявэксперименте
in

vitr
o

рис
).


Примечание
: *
-

статистическизначимыеотличияотносительноконтроля р


0,05)

Рис

2
.

Сравнительныйанализспектрапоглощенияпродуктов
окислительноймодификациибелковспленоцитовкрысподдействиеммМ
L
-
NAME

in

vitro


Втимусеп
оддействием
L
-
NAME

in

vivo

вдоземгкг

наблюдается
тенденция
к
увеличени
юсодержаниякарбонильныхпроизводных
белководнако
,

статистическизначимыхразличийнеотмечается
(
рис
).

λ(нм
)

L
-
NAME
(5
мМ)

Ğ.Ž.п./
гбелка

λ(нм)
230 254
270 280
356
363 370
428
430 434
520 535
S
АДНФГн.

S
КДНФГн.

S
АДНФГо.

S
КДНФГо.
S
общ.
контроль1
5,1 [2,2; 9,6]
1,6 [0,24; 4,8]
0,4 [0,3; 0,9]
0,06 [0,03; 0,12]
6,69 [3,8; 14,9]

>-ED(25мг/кг)
3,6 [2,7; 10,5]
2,7 [1,1; 5,5]
2,8 [2,2; 5,9]*
0,6 [0,4; 1,4]*
10,9 [7,2; 23,5]*
p = 0,072
p = 0,68
p = 0,11
p = 0,002
p = 0,001
0
0,01
0,02
0,03
0,04
0,05
0,06
e.o.
п
./
г
белка
e.o.n./
г
белка
230 254
270 280
356
363 370
428
430 434
520 535
S
АДНФГн.

S
КДНФГн.

S
АДНФГо.

S
КДНФГо.
S
общ.
контроль
15,8 [15,6; 20,5]
7,4 [4,5; 9,8]
6,5 [4,7; 9,7]
1,1 [0,8; 1,7]
33,4 [25,7; 39,4]

L-Name (5
мМ)
25,7 [11,7; 44,9]
10,6 [7,1; 31,8]
23,5 [9,8; 44,9]*
4,7 [2,1; 8,0]*
72,1 [31,3; 129,8]*
0,037
p = 0,76
p = 0,23
p = 0,037
p = 0,037
0
0,05
0,1
0,15
0,2
0,25
0,3
0,35
12



Рис

3
.

Сравнительныйанализспектрапоглощенияпродуктов
окислительноймодификациибелков
тимуса

экспериментальнойгруппы
под
действием
L
-
NAME
вдозе
мгкг

С
труктурнаяорганизациякровяногоруслатимусаорганоспецифичнаи
находитсявпрямойзависимостиотстр
оениясоединительнотканногокаркасаВ
своюочередь1
-
нитро
-
L
-
аргининметиловыйэфирспособствуетсужениюсосудов
чтоможет
затруднитьб
иодоступност
ь

данноговеществадлявилочковойжелезы

Предположениеоботсутствииизменений
in

vivo

попричинеслабой
б
иодоступности
L
-
NAME

втканьтимус
а

подтверждаетсявэксперименте
in

vitro
.
Такв
тимоцит
ах
инкубированныхвполнойпитательнойсредес
внесениеммМ
L
-
1$0(былоотмеченостатистическизначимоеповышениеобщейплощадипод
кривойотно
сительноконтрольногозначения
рис
4
).



Примечание
: *
-

статистическизначимыеотличияотносительноконтроля р
0,05)

Рис
4
.

Сравнительныйанализспектрапоглощенияпродуктов
окислительноймодификациибелков
тимоцитов

крыс
поддействиеммМ
L
-
NAME

in

vitro


Вусловиях
in

vivo
-

и
in

vitro
-
моделированиядефицитасинтезаоксидаазота
вселезенкедолявторичныхмаркеровстатистиче
скизначимовозрасталавтимусе
данныйпоказательнеизменялся

(
табл 

Такимобразомможнопредположитьчтодляселезенкивусловиях
моделированиядефицитасинтезаоксидаазотамишенямидляповреждающих
агентовявляютсяостаткиаминокислотосновного

характераДлятимусатакой
специфичностиотмеченонебыло

L
-
NAME
(5
мМ)

e.o.
п
./
гбелка

λ(нм)

λнм.
230 254
270 280
356
363 370
428
430 434
520 535
S
АДНФГн.

S
КДНФГн.

S
АДНФГо.

S
КДНФГо.
S
общ.
контроль1
29,2[20,6;53,7]

L-NAME
(25мг/кг)
33,6 [22,5;80,1]
p = 0,19
P = 0,31
p = 0,31
p = 0,15
p = 0,15
12,65 [8,9; 26,3]
14,08 [10,5; 40,8]
7,2 [4,8; 15,5]
6,8 [4,4; 14,9]
7,8 [5,9; 15,9]
10,7 [6,4; 20,5]
1,7 [1,3; 3,2]
1,9 [1,1; 3,8]
0
0,05
0,1
0,15
0,2
0,25
0,3
0,35
e.o.
п
./
г
белка
13


Таблица

3

Доляпервичныхивторичныхмаркеровокислительногострессавселезенкеи
тимусекрысвусловиях
in

vivo
-

и
in

vitro
-
моделирования

дефицитасинтезаоксидаазотаМе
[
min
;
max
]



Доля
первичных
маркеров

Долявторичных
маркеров

селезенка

Контроль

78,4 [56,2; 85,5]

20,6 [10,1; 35,6]

L
-
NAME

мгкг

>@ р 

>@ р 

Контроль
in vitro

75,7 [67,2; 79,0]

24,3 [21,8; 30,6]

L
-
NAME

мМ

69,5
[
60,1;
75,9
]
р 

30,5
[24
,1; 36,8
]
р 

тимус

Контроль

73,6
[
70,9; 75,8
]

26,4
[
24,6; 31,1
]

L
-
NAME

мгкг

74,9 [70
,1; 78,9
]

25,1 [21
,1; 29,9
]

Контроль
in

vitro

76,2
[65
,4; 78,6
]

23,8
[20
,1; 26,5
]

L
-
NAME 5
мМ

77,3
[
68,7; 80,4
]

22,7
[
19,8; 27,4
]

Примечание
: *
-

статистическизначимыеотличияотносительногруппыконтроля


Характеристикаокислительногокарбо
нилированиябелковпод
влиянием
субстратасинтезаоксидаазота
±

L
-
аргинина

Влияниеизолированноговведения
L
-
аргининанаформирование
карбонильныхпроизводныхбелков

Поддействием
L
-
аргинина
in

vivo

(
рис и
in

vitro

рис
общаяплощадь
подкривойокислительноймодификациибелковселезенкинеизменяется
относительноконтроляоднакоспектрпоглощенияпродуктовпретерпевает
изменения


Примечание
:

*
-

статистическизначимыеотличияотносительноконтроля р

Рис
5
Сравнительныйанализспектрапоглощенияпродуктов
окислительноймодификациибелковселезенкиподвлиянием
L
-
аргинина


Примечание
:

*
-

статистическизначимыеотличияотносительноконтроля р


Рис
6
Сравнительныйанализспектрапоглощенияпро
дуктовокислительной
модификациибелковспленоцитовподвлияниеммМ
L
-
аргинина
in

vitro

λ(нм)
230 254
270 280
356
363 370
428
430 434
520
535
S
АДНФГн.

S
КДНФГн.

S
АДНФГо.

S
КДНФГо.
S
общ.
контроль2
5,2 [2,5; 9,4]
1,2 [0,3; 5,4]
0,5 [0,3; 1,0]
0,06 [0,04; 0,1]
6,3 [3,2; 13,6]
>-аргинин
(500мг/кг)
4,0 [0,07; 6,1]*
1,2 [0,2; 1,8]
0,7 [0,2;1,8]*
0,2 [0,1; 0,5]*
6,9 [1,0; 10,0]
p = 0,7
p = 0,025
p = 0,64
p = 0,057
p = 0,0035
0
0,01
0,02
0,03
0,04
0,05
0,06
e.o.
п
./
г
белка
λ(нм)
230 254
270 280
356
363 370
428
430 434
520
535
S
АДНФГн.

S
КДНФГн.

S
АДНФГо.

S
КДНФГо.
S
общ.
контроль
6,5 [4,7; 9,7]
33,4 [25,7; 39,4]
>-аргинин
(5мМ)
5,8 [2,9;22,4]
18,4 [12,9; 81,1]
p = 0,76
p = 0,36
p = 0,045
1,1 [0,8; 1,7]
2,6 [0,5; 5,4]*
15,8 [15,6; 20,5]
7,7 [6,6; 17,5]*
P = 0,045
7,4 [4,5; 9,8]
4,7 [1,8; 17,2]
p = 1,0
0
0,05
0,1
0,15
0,2
0,25
0,3
e.o.
п
./
г
белка
14


Втимусекрысвсвоюочередьпроявляетсячеткийантиоксидантный
эффектдействия
L
-
аргинина
in

vivo

(
рис и
in

vitro

рис
).


Примечание
:

*
-

статистическизначимыеотличияотносительноконтроля р

Рис
7
Сравнительныйанализспектрапоглощенияпродуктов
окислительноймодификациибелковтимусаподвлиянием
L
-
аргинин

in

viv
o



Примечание
:

*
-

статистическизначимыеотличияотносительноконтроля р

Рис
8
Сравнительныйанализспектрапоглощенияпродуктов
окислительноймодификациибелковтим
o
цитовподвлиянием
L
-
аргинина

Вусловияхстимулированиясинтезаоксидаазотаобщееколичество

карбонильныхпроизводныхбелковнеизменяетсяотносительнозначений
контрольнойгруппыОднако
,
изменяетсяструктураспектрапоглощения
продуктовокислительноймодификациибелковселезенкиснижаетсяколичество
АДНФГнейтральногохарактераповышаетсясод
ер
жаниеКДНФГосновного
характера
Длятимусапрослеживаетсятенденцияснижениясодержания
карбонильныхпроиз
водныхбелковРазнонаправленностьизменений

окислительногостатусаиммунокомпетентныхоргановможетобъяснятьсяразным
белковымсоставомтимусаи
селезенкитоестьцитопротекторныйи
цитотоксическийэффектоксидаазотавозможноопределяетсяего
взаимодействиемсдоступнымимишенями

Использование
L
-
аргининавусловияхэкспериментальногодефицита
синтезаоксидаазота

Присочетанномприменении
L
-
NA
ME

мгкг и
L
-
аргининаобщая
площадьподкривой
спектра
поглощенияпродуктовокислительноймодификации
белковселезенкистатистическизначимонеотличаетсяотзначенийконтрольной
группы
табл
4
).
Длятимусаотмечаласьнесколькоинаятенденциязначен
и
е

общейплощадиподкривойспектрапоглощенияпродуктовокислительной
λ(нм)
230 254
270 280
356
363 370
428
430 434
520
535
S
АДНФГн.

S
КДНФГн.

S
АДНФГо.

S
КДНФГо.
S
общ.
контроль
28,4[20,6;53,7]
>-аргинин
(5мМ)
20,9[6,8;32,8]
p = 0,13
8,4 [3,7; 17,9]
13,05 [9,1; 24,3]
1,2 [0,3; 1,9]
1,4 [0,9; 2,7]
7,3 [5,1; 14,08]
6,1 [1,2; 8,4]*
6,2 [4,4; 12,5]
5,2 [1,5; 6,5]*
p = 0,09
p = 0,02
p = 0,023
p = 0,12
0
0,02
0,04
0,06
0,08
0,1
0,12
e.o.
п
./
г
белка
λ(нм)
230 254
270 280
356
363 370
428
430 434
520
535
S
АДНФГн.

S
КДНФГн.

S
АДНФГо.

S
КДНФГо.
S
общ.
контроль
27,5 [20,9; 44,8]
>-аргинин
(5мМ)
10,9 [3,4; 18,8]*
p=0,03
15,5 [12,1; 25,1]
4,2 [2,08; 8,7]*
5,5 [3,3; 8,1]
2,4 [0,7; 4,9]*
0,6 [0,08; 1,3]
1,03 [0,8; 1,9]
2,7 [0,5; 5,5]
5,2 [3,1; 11,6]
p=0,03
p=0,05
p=0,31
p=0,66
0
0,02
0,04
0,06
0,08
0,1
0,12
0,14
0,16
0,18
e.o.
п
./
г
белка
15


модификациибелков
статистическизначимоснижается
относитель
нозначений
контрольнойгруппызасчетАДНФГ
и
КДНФГ
нейтральногохарактера
табл
4
).


Таблица
4

Значенияплощадипод

к
ривойспектрапоглощениякарбонильныхпроизводных
белков
селезенки

итимуса

вусловияхкорригирующегодействия/
-
аргинина


селезенка

тимус

Контроль

L
-
аргинин мгкг

+
L
-
NAME

мгкг

Контроль

L
-
аргинин мгкг

+
L
-
NAME

мгкг

S
АДНФГн

4,0
[2,7; 10,01]

3,2 [1,9; 6,8]

13,9 [10,6; 26,1]

3,2 [2,2; 7,1]*p=0,001

S
КДНФГн

1,1 [0,32; 5,9]

1,4 [0,8; 2,1]

6,9 [5,6; 14,5]

3,8 [0,8; 6,3]*p=0,005

S
АДНФГо

0,32 [0,28; 1,51]

1,1 [0,7; 1,6]

7,8 [4,9; 13,1]

6,1 [1,1; 13,6]

S
КДНФГо

0,05 [0,03;
0,32]

0,2 [0,1; 0,3]

1,7 [0,8; 3,1]

1,3 [0,3; 2,8]

S

ОБЩ

6,57 [3,9; 14,4]

6,09 [4,8; 10,05]

29,8 [20,6; 53,7]

13,7[5,4;29,9]*p=0,009


Примечание
:

*
-

статистическизначимыеотличияо
тносительноконтроля р


Дляселезенкиобщаяплощадьподкривойокислительноймодификации
белковвэкспериментальнойгруппесочетанногоприменения
L
-
NAME

нафоне
L
-
аргининанижеотносительногруппы
L
-
NAME

инеотличаетсяотзначений
группы
L
-
аргининчтосвидетельствуетокорригир
ующемдействииаргининапри
использовании
L
-
NAME

вдоземгкг
рис
9
).


Примечание
: #
-

статистическизначимыеотличияотгруппы/
-
1$0(мгкг

(p0,05)

РисСравнительный

анализспектрапоглощенияпродуктов
окислительноймодификациибелковселезенкиэкспериментальнойгруппы/
-
1$0( мгкг нафоне/
-
аргининаотносительногруппы/
-
1$0( мгкг и
L
-
аргинин


Прииспользовании/
-
NAME

мгкг 
нафоне/
-
аргининаотмечает
ся
статистическизначимоеснижениеобщейплощадиподкривой

спектра
поглощенияпродуктовокислительноймодификациибелковотносительногруппы
L
-
NAME
засчетстатистическизначимогоснижениясодержанияАДНФГи
КДНФГнейтральногохарактераи

АДНФГосновного

характера
рис 

λнм.
230 254
270 280
356
363 370
428
430 434
520 535
S
АДНФГн.

S
КДНФГн.

S
АДНФГо.

S
КДНФГо.
S
общ.
>-аргинин
(500мг/кг)
1,2 [0,2; 1,8]
0,7 [0,2;1,8]
0,2 [0,1; 0,5]
6,9 [1,0; 10,0]

>-EĂŵĞ(25мг/кг)
2,7 [1,1; 5,5]
2,8 [2,2; 5,9]
0,6 [0,4; 1,4]
10,9 [7,2; 23,5]
>-ED(25мг/кг)
+>-аргинин(500мг/кг)
1,4 [0,8; 2,1]
#
1,1 [0,7; 1,6]
#
0,2 [0,1; 0,3]
6,09[4,8;10,05]
#
#
p = 0,007
3,2 [1,9; 6,8]
3,6 [2,7; 10,5]
4,0 [0,07; 6,1]
#
p = 0,014
#
p = 0,001
#
p = 0,001
0
0,01
0,02
0,03
0,04
0,05
0,06
е.о.п./гбелка
16



Примечание
: ^
-

статистическизначимыеотличияотгруппы
L
-
аргинина
p
0,05);

#
-

статистическизначимыеотличияотгруппы
L
-
NAME

мгкг
p
0,05)

Рис

Сравнительныйанализспектрапоглощенияпродуктов
окислительноймодификациибелковтимусаэкспериментальнойгруппы
L
-
NAME

мгкг нафоне
L
-
аргининаотносительногруппы
L
-
NAME

мгкг и
L
-
аргинин


Дляоценкиустойчивостибелковкповреждающемувозде
йстви
ю
используетсяреакцияФентона
широкопримен
яе
мая
,

какисточник
гидроксильныхрадикалов
Вусловияхм
оделированиядефицитасинтезаоксида
азотанаблюдалосьистощениерез
ервно
-
адаптационногопотенциаласелезенки
преимущественнозасчетдинитрофенилгид
разоновосновногохарактера

рис

11)
.




Примечание
: *
±

статистическизначимыеотличияо
тконтрольнойгруппы р

Рис

11
.

Состояниерезервно
-
адаптационногопотенциала
динитрофенилгидразоновселезенкивусловиях

in

vivo
-
моделированиядефицита
синтезаоксидаазота


λнм.
230 254
270 280
356
363 370
428
430 434
520 535
S
АДНФГн.

S
КДНФГн.

S
АДНФГо.

S
КДНФГо.
S
общ.
>-аргинин
(500мг/кг)
20,9[6,8;32,8]

>-EĂŵĞ(25мг/кг)
33,6 [22,5;80,1]
>-ED(25мг/кг)
+>-аргинин(500мг/кг)
13,7[5,4;29,96]
#
#
p = 0,002
3,2 [2,2; 7,1]^
#
3,8 [0,8; 6,3]
#
6,1 [1,1; 13,6]
#
1,3 [0,3; 2,8]
8,4 [3,7; 17,9]
5,2 [1,5; 6,5]
6,1 [1,2; 8,4]
1,2 [0,3; 1,9]
14,08 [10,5; 40,8]
6,8 [4,4; 14,9]
10,7 [6,4; 20,5]
1,9 [1,1; 3,8]
#
p=0,001; ^ p = 0,02
#
p = 0,003
#
p = 0,04
0
0,05
0,1
0,15
0,2
0,25
0,3
0,35
е.о.п./г.белка
17


Поддействиемингибиторасинтезаоксидаазота
in

vivo

отмечается
тенденцияистощениярезервно
-
адаптационногопотенциалатимусазасчет
АДНФГ
нейтрального
харак
тера рис
1
2
).

Уровеньрезервно
-
адаптационного
потенциалаувеличивается

по
ддействием
L
-
аргининаатакже

относительно
значенийконтрольнойгруппы

присочетанномприменении
L
-
NAME

и
L
-
аргинина
чтоуказываетнаположительноевлияние
L
-
аргинина



Примечание
: *
±

статистическизначимыеотличияот
контрольнойгруппы р
0,05)

Рис
1
2
.

Состояниерезервно
-
адаптационногопотенциала
динитрофенилгидразонов

тимусавусловиях
in

vivo
-
моделированиядефицита
синтезаоксидаазота


Изполученныхрезультатовследуетчтовусловияхдефицитасинтеза
оксидаазотазначениерезервно
-
адаптационногопотенциаласнижается
относительнопоказателейконтрольнойгруппыПолученнаятенденция
истощениярезервно
-
адаптационногопотенциалаиммунокомпетентныхорганов
можетсвидетельствоватьонедостаточнойактивностиантиоксидантныхсистеми
накоп
ленииповрежденныхимеющихслабуюфункциональнуюактивность
белков


3.2

.
Оценкасостояниялизосомальногоцистеиновогопротеолиза

Протеолитическиесистемыспособныудалятьповрежденныебелкиименно
поэтомуих

можно

рассматриват
ь

каквт
оричныеантиоксидантн
ыесистемы
.
Изучениеактивностипроте
ин
азвусловияхокислительногострессаважнодля
пониманияпроцессаобновлениябелков

Внутрибрюшинноевведение/
-
1$0(вдоземгкглабораторным
животнымвтечениеднейприводиткувели
чениюобщейактивности
катепсинов

В
,
L

иН

селезенкиотносительноконтролязасчетувеличения
несед
иментируемой
активности рис
.

1
3)
.

18



Примечание
:

*
-

статистическизначимыеотличияо
тносительноконтроля р

Рис
1
3
.

АктивностькатепсиновВ
L

иНселезенкивусловиях
in

vivo
-
ингибирования

синтезаоксидаазота

АктивностькатепсиновВ
L
Нтимусанеизмениласьотносительно
значенийконтрольнойгруппыподдействием
L
-
NAME

вдоземгкг

(
рис 


Рис
4
.

АктивностькатепсиновВ
L

иН
тимуса
вусловиях
in

vivo
-
ингибирования

синтезаоксидаазота

Внутрижелудочноевведение
L
-
аргининавдоземгкгвтечениедней
невызывалостатистическизначимыхизмененийактивностикатепсиновВ
L
Н
селезенкиитимусазначениянеседиментируемойседиментируемойиобщей
ак
тивностейблизкикзначениямданных

показателейконтрольнойгруппы



РисАктивностькатепсиновВ/иНселезенкивусловиях
in vivo
-
стимуляциисинтезаоксидаазота

19




РисАктивностькатепсиновВ
L

иНтимусавусловиях
in

vivo
-
стимуляции
синтезаоксидаазота


Вусловиях
in vitro
-
моделированиядефицитасинтезаоксидаазота
отмечаетсяоднонаправленнаятенденциядляспленоцитовитимоцитов
увеличени
еобщейактивностикатепсинов

/иНотносительнознач
ений
контрольнойгруппы
рисирис 


В
условиях
in

vitro
-
моделированиядополнительногосинтезаоксидаазота
статистическизначимыхразличий
активностикатепсиновВ
L

иН
спленоцитови
тимоцитов

относительнозначенийконтрольнойгруппыотмеченонебыло
.


Примечание

*
-

статистическизначимые
отличияотконтрольнойгруппы р


РисАктивностькатепсинов
В
L

иНспленоцитоввусловиях
in

vitro
-
моделированиядефицита
синтезаоксидаазота


Примечание
: *
-

статистическизначимые
отличияотконтрольнойгруппы р


РисАктивностькатепсиновВ
L

иНтимоцитоввусловиях
in

vitro
-
моделированиядефицитасинтезаоксида
азота

20


РисАктивностькатепсиновВ/и
Нспленоцитоввусл
овиях
in vitro
-
моделированиясинтезаоксидаазота


РисАктивностькатепсиновВ/и
Нтимоцитоввусловиях
in vitro
-
моделированиясинтезаоксидаазота

Вусловияхмоделированиядефицитасинтезаоксидаазотавыход
катепсиноввцитозольвозможно
происходитзасчетповреждениямембраныо
чемсвидетельствуетувеличениекоэффициенталабил
ьностикислойфосфатазы
дляселезенкиконтрольнойгруппы“вгруппе
L
-
NAME

±

“адля
тимуса
±

“против“

Сцельюоценки
степениаутокаталитическойактивациипроведен
сравнительныйанализкоэффициентааутокаталитическогодействия К
ас
a
)
катепсиновВ
L
Нселезенкиитимусакрыс

Вусловиях
in

vitro
-
модулирования
синтезаоксидаазотанаблюдаетсяодинаковаятенденцияизменени
я
коэффициентааутокаталитическогодействиякатепсиновВ
L
Нспленоцитов
(
табл итимоцитов табл

5
вусловияхинкубациивполнойпитательнойсреде
с
L
-
аргинином
±

повышениекоэффициентаавусловияхинкубированиявполной
питательнойсредес
L
-
NA
ME

±

снижениекоэффициентааутокаталитического
действияотносительнозначенийконтроляигруппы
L
-
аргинина


Таблица
5

Значениекоэффициетааутокаталитическогодействиякатепсинов
B
,
L
,
H

спленоцитоввусловиях
in

vitro
-
модулированиисинтеза
NO

Ме>
min
;
max
])


Кас
a

катепсинаВ

Кас
a

катепсина
L

Кас
a

катепсина
H

селезенка



Контроль

1,85 [1,82; 2,05]

1,56 [1,39; 1,65]

1,74 [1,64; 2,08]

L
-
аргинин

мМ

2,03 [1,73; 2,14]*

р 

1,70 [1,39; 1,97]
*

р 
4
5

4,01 [3,78;
4,11]
*
р 

L
-
NAME

мМ

0,27 [0,19;

0,33]
*
р 

0,77 [0,51; 1,06]
*

р 

0,47 [0,22; 0,62]
*

р 

тимус

Контроль

1,15 [1,11; 1,25]

1,06 [1,06; 1,20]

1,09 [1,00; 1,20]

L
-
аргинин

мМ

1,57 [1,14; 1,80]*
р 

1,21 [1,13; 1,33]*
р 

1,13 [1,06; 1,53]*
р 

L
-
NAME

мМ

0,52
[0,37; 0,70]*
р 

0,50 [0,08; 0,59]*

р 

0,68 [0,38; 1,12]*

р 

Примечание
: *
±

статистическизначимыеотличияо
тконтрольнойгруппы р


21


Совместноевведение
L
-
аргининаи
L
-
NAME

мгкг способствует
статистическизначимомуувеличениюобщейинеседиментируемойактивности
катепсинов
L

иНселезенкиотносительноконтроля
рис
21
тоестьвусловиях
даннойэкспериментальноймоделиэффект
L
-
NAME

сохраняется



Примечание
: *
±

статистическизначимыеотличияо
тконтрольнойгруппы р

Рис
21
.

АктивностькатепсиновВ
L

иН
селезенки
вусловиях
in

vivo

корригирующегодействия
L
-
аргинина



Рис
22
.

АктивностькатепсиновВ
L

иН
тимуса
вусловиях
in

vivo

корригирующегодействия
L
-
аргинина


Прианализеполученныхданныхбыливыявленыпрямыекорреляционные
связимеждуобщейплощадьюподкривойокислительноймодификациибелкови
общейактивностьюкатепсина
L

иНселезенкиподвлиянием
L
-
NAME

вусловиях
in

vivo

табл и
in

vitro

табл
7
Даннаятенденциясвидетельствуето
существованиивзаимосвязипроцессовокислительногоповреждениябелкови
лизосомальногоцистеиновогопротеолизавусловияхдефицитасинтезаоксида
азота




22



Таблица

Коэффициенты
корреляции
R
междуобщимсодержаниемкарбонильных
производныхбелковиобщейактивностьюкатепсиновВ
L

иНселезенкии
тимусавусловиях
in

vivo
-

изменениясинтеза

NO


катепсинВ

катепсин
L

катепсинН

селезенка

тимус

селезенка

тимус

селезенка

тимус

Контроль

0,36

0,24

0,55

-
0,33

0,55

-
0,024

L
-
NAME


0,38

-
0,
20

0,62*

р 

-
0,
20

0,67*

р 

-
0,
10

L
-
аргинин

0,19

-
0,57

-
0,14

0,27

0,071

0,21

L
-
NAME

+
L
-
аргинин

-
0,05

-
0,61

-
0,11

0,39

0,36

0,23

Примечание
: *
±

статистическизначимыеотличияо
т
контрольнойгруппы р


Таблица
7

Коэффициентыкорреляции
R
междуобщимсодержаниемкарбонильных
производныхбелковиобщейактивностьюкатепсиновВ
L

иН
селезенкии
тимуса
вусловиях
in

vitro
-

изменениясинтеза

NO



катепсинВ

катепсин
L

катепсинН

спленоциты

тимоциты

спленоциты

тимоциты

спленоциты

тимоциты

Контроль

0,56

0,40

0,50

-
0,62

0,50

0,20

L
-
NAME

мМ

-
0,50

0,80

0,
95
*

р 

0,60

0,90*

р 

0,87

L
-
аргинин

мМ

-
0,87

-
0,60

0,20

-
0,60

-
0,50

-
0,60

Примечание
: *
±

статистически
значимыеотличияо
тконтрольнойгруппы р


Такимобразомактивностьлизосомальныхцистеиновыхпротеиназв
условияхмоделированиядефицитасинтезаоксидаазотанарастаети
сопровождаетсявыходомкатепсиноввцитоплазмузасчетповреждения
лизосом
альноймембраныВажноотметитьчтоизменениеуровняоксидаазота
влияетнааутопр
o
цессингкатепсиновВ
L
Нчтоимеетважноефункциональное
значениеКромеэтогопроцесскарбонилированиябелковиактивация
лизосомальныхцистеиновыхпротеиназ
L

иНселезенкивзаимосвязаны


ВЫВОДЫ


1.

Подавлениесинтезаоксидаазотаконкурентнымингибитором
N
-
нитро
-
L
-
аргининметиловымэфиромприводиткнарастаниюсодержания
карбонильныхпроизводныхбелковспреобладанием
динитрофенилгидразоновосновногохарактерас
елезенкиитимусапри
этомнаблюдаетсяистощениерезервно
-
адаптационногопотенциалаи
увеличениедоливторичныхмаркеровокислительногостресса

23


2.

Вусловияхдефицитасинтезаоксидаазотапроисходитактивация
лизосомальныхцистеиновыхпротеиназВ
L
Нселе
зенкиитимусакрыс
сопровождаемаяихвыходомвцитоплазмузасчетповреждения
лизосомальноймембраны

3.

Воздействиесубстратасинтезаоксидаазота
L
-
аргининаприводитк
снижениюуровнякарбонильныхпроизводныхбелковбезизменения
активностикатепсиновВ
L
НтимусаиселезенкикрысПрименение/
-
аргининавусловияхмоделированиядефицитасинтезаоксидаазота
оказываеткорригирующеевоздействиенапоказателиокислительной
модификациибелководнакодляактивностикатепсиновсохраняется
эффект
N
-
нитро
-
L
-
ар
гининметиловогоэфира

4.

Междуокислительнымкарбонилированиембелковиактивностью
лизосомальныхцистеиновыхпротеиназ/иНселезенкивыявлена
положительнаякорреляционнаясвязьвусловияхмоделированиядефицита
синтезаоксидаазота


СПИСОКРАБОТОПУБЛИК
ОВАННЫХПОТЕМЕДИССЕРТАЦИИ


Работыопубликованныевведущихрецензируемыхжурналах
рекомендованныхВысшейаттестационнойкомиссиейМинобрнаукиРоссии



1.

Абаленихина

ЮВ
Катепсин

Виммунокомпетентныхоргановкрысв
условияхмодуляциисинтеза12>Текст@ЮВАбаленихина
,

МАФомина
Научноеобозрение

±

2013.
±

№
-

С
-
52
.

печл

2.

Абаленихина

ЮВ
Окислительнаямодификациябелковиизменение
активностикатепсина/
селезенкикрысвусловияхмоделированиядефицита
синтезаоксидаазота>Текст@ЮВАбаленихинаМАФоминаСАИсаков
Росмедико
-
биолвестнимакадИППавлова
±

2013.
±

№
±

С
-
48
.
(0,34
печл

3.

Абаленихина

ЮВ
Окислительнаямодифика
циябелковселезенкикрыс
приэкспериментальномдефицитесинтезаоксидаазотаразнойвыраженности
>Текст@ЮВАбаленихина
,

МАФомина
Фундаментальныеисследования
±

2013.
±

№ часть 
-

С
-
1855.

(
печл

4.

Абаленихина

ЮВ
Окислительнаямодификациябелковиактивность
катепсинаНтимоцитовкрысвусловияхLQYLWURмодулированиясинтезаоксида
азота ,, >Текст@ЮВАбаленихина
,

МАФомина
Казанмеджурн

±

2014.
±

№
±

С
-
557.

печл


Работы
опубликованныевдругихрецензируемыхжурналах


1. Fomina, M.A. Cathepsins B, L and H Splenocytes as the Secondary Antioxidant
Systems in the Conditions

of Carbonyl Stress [Text] / M.A. Fomina,
Yu.V.
Abalenikhina
// Advances in Biochemistry, 2015.
±

Vol.3,
№
±
P. 5
-
8
.

(0,25
печ
.
л
.)



24


Материалынаучныхконференций


1.

Абаленихина

ЮВ
Влияние/
-
аргининанаактивностькатепсиновВиН
селезенкикрыс>Текст@ЮВАбаленихина
,

МАФомина&бнаучтр
посвящ
. 90
-
летиюсоднярождениявыдающегосяобщегопатологаи
патофизиологаакадемикаГНКрыжановскогои
-
летиюсоднярождения
основоположникароссийскойнаучнойклиническоймедициныСПБоткина
©Актуальныепроблемыклиническойиэкспериментальнойпатоло
гииªподред
ЮЮБяловскогоВВДавыдова
±

РязаньРязГМУ
±

С
-
17.

печл

2.

Абаленихина

ЮВ
Активностькатепсина/спленоцитовкрысвусловиях
in vitro
-
модулированиясинтезаоксидаазота>Текст@ЮВАбаленихина
,

МА
Фомина&б

научтрпоматериалам,ХМеждунарнауч
±

практконф
©Достиженияфундаментальныхнаукивозможноститрансляционноймедициныв
решенииактуальныхпроблемздравоохраненияªподредХМГалимзянова>и
др@
±

АстраханьГБОУВПОАстр
аханскаяГМА
3.
±

С
-
 печл

3.

Абаленихина

ЮВ
Влияние1
-
нитро
-
L
-
аргининметиловогоэфирана
активностьи

аутопроцессингкатепсина/крысLQYLYRиLQYLWUR>Текст@ЮВ
Абаленихина
,

МАФомина&бнаучтрпоматериаламХ,,региональнойнауч
±

практконфсМеждунаручастием©Обменвеществприадаптациии
повреждении днилабораторнойдиагностикиюжногофедеральногоокруга ª
подредЗИМикашинович
±

РостовнДГБОУВПОРостГМУ
±

С
-
7.
печл

4.

Абаленихина

ЮВ
Влияние1
-
нитро
-
L
-
аргининметиловогоэфирана
спектрокислительноймодификациибелковижизнеспособностьспленоцитовLQ
YLWUR>Текст@ЮВАбаленихина
,

МАФоминаСбнаучстатей9Роснауч
±

практконф©ЗдоровьечеловекавХХ,векеªподредпрофСС

Ксембаева
КГМУ
±

КазаньИзд
-
во
©Отечествоª
±

С
-
 печл

5.

АбаленихинаЮВ

Влияниемодуляторовсинтезаоксидаазотана
окислительнуюмодификациюбелковспленоцитовкрыс>Текст@ЮВ
АбаленихинаСбтрМеждунарсимпоз©Биох
имия
±

основанаукожизниª
состНИАкбероваФГАОУВПО©Казанский Приволжский федеральный
университ
етª
-

Казань
±

С
-
 печл

6.

АбаленихинаЮВ

Корригирующеедействие/
-
аргининана
окислительнуюмодификациюбелковселезенкикры
свусловияхмоделирования
дефицитасинтеза12>Текст@ЮВАбаленихинаБюллетеньсеверного
государственногомедицинскогоуниверситетаподредСИМалявской>идр@
±
Архангельск
СГМУ
±

№
-

С
-
 печл

7.

Абаленихина

ЮВ
С
пектрокислительноймодификациибелковкакновый
подходканализувлияния/
-
аргининанаобразованиекарбонильныхпроизводных
протеиновтимусакрыс>Текст@ЮВАбаленихина
,

МАФоминаСбтезпо
материаламВсероснауч
±

практконфсМеждунаруч
астиемпосвящ
-
летию
Рязанскогогосударственногоуниверситета©Здравоохранениеобразование
наукаинновацииªподредпрофРЕКалинина>идр@
±

Рязань

РИОРязГМУ
2013.
±

С
-
 печл

25


8.

ФоминаМАВлияние/
-
аргининанаактивность
катепсинов/иН
селезенкикрысвусловияхмоделированногодефицитасинтезаоксидаазота
>Текст@МАФомина
ЮВАбаленихина

&бнаучстатейпоматериаламРос
науч
±

практконфсМеждунаручастием©Актуальныевопросымедицинской
биохимииикли
ническойлабораторнойдиагностикиªподредИГМустафина
>идр@КГМУ
±

КазаньИзд
-
во
©Отечествоª
±

С
-
 печл

9.

Абаленихина

ЮВ
Регуляцияактивностикатепсина/селезенкикрысв
условияхLQYLYRмоделированиядефецитасинтеза

оксидаазота>Текст@ЮВ
Абаленихина
,

МАФоминаСбстатейМеждунарнауч
±

практконф
©АктуальныевопросыразвитиянаукиªподредААСукиасян
±

Уфа

РИЦ
БашГМУ
±

С
-
66
.

печл

10.

Абаленихина

ЮВ
Резервно
-
адаптационный
потенциал
иммунокомпетентныхтканейпри/
-
NAME
-
индуцируемомокислительном
стрессе>Текст@ЮВАбаленихина
,

МАФомина&бнаучтрпоматериалам
ХюбилМеждунарконф©Окислительныйстрессисвободнорадикальные
патологииªФГБУ©Российскийкарди
ологическийнаучно
-
производственный
комплексªМЗРФ
±

Пицунда

(
Абхазия
), 2014.
±

С
. 7
.

(0,063
печ
.
л


Патент

на

изобретение


1.

Пат
. 2524667
РФ
,
МПК
G
01
N

33/52.
Способ

комплексной

оценки

содержания

продуктов

окислительной

модификации

белковвтканяхи
биологическихжидкостях>Текст@

МАФомина

ЮВАбаленихина
НВ
ФоминаААТерентьевГБОУВПОРязгосмедун
-
тимакадИППавлова
±

заявлоп
ублБюл
±

с печл


Методическиерекомендаци
и


1.

ФоминаМАСпособкомплекснойоценкисодержанияпродуктов
окислительноймодификациибелковвтканяхибиологическихжидкостях
методическиерекомендации>Текст@МАФомина
ЮВАбаленихина

ГБОУ
ВПОРязГМУМинздрава
±

РязаньРИОРязГМУ
, 2014.
±

60
с печл

Ɋɚɛоɬɚɜы&#x 000;полнɟнɚɜȽоɫɭɞɚɪɫɬɜɟнномɛюɞжɟɬномоɛɪɚзоɜɚɬɟльн&#x 026;耦怀ɭчɪɟжɞɟ 6;瀀ии
ɜыɫшɟɝоп 6;ꀀоɮɟɫɫионɚл&#x 027;怀ноɝооɛɪɚ&#x 026;ကоɜɚния©Ɋ&#x 027;退зɚнɫкийɝ&#x 000;оɫɭɞɚɪɫɬ 5;쀀ɟнный
мɟɞицинɫки&#x 026;  ɭниɜɟɪɫи&#x 026;쀀ɟɬимɟниɚкɚɞɟмик&#x 025;ꀀИППɚɜлоɜɚªМиниɫɬɟɪɫɬ 5;쀀ɚ
зɞɪɚɜооɯɪɚ&#x 026;瀥нияɊоɫɫи&#x 000;йɫкойɎɟɞ&#x 025;ɪɚции

Нɚɭчныйɪɭкоɜоɞиɬɟл&#x 027;怀

кɚнɞиɞɚɬ&#x 026;怀ɟɞицинɫкиɯ&#x 000;нɚɭкɞоц&#x 025;нɬɎоминɚ&#x 000;МɚɪияȺл&#x 025;кɫɟɟɜнɚ

Оɮициɚльныɟоппон 5;нɬы

ШɭмɚɟɜКонɫɬɚнɬинȻоɪиɫоɜи 7;က
-
ɞокɬоɪɛиол&#x 026;耥퀀ичɟɫкиɯ� 0; нɚɭкɫɬɚ&#x 000;ɪшийнɚɭчный
ɫоɬɪɭɞниклɚɛоɪɚɬоɪииɚзоɬɮикɫ 5;ꀀцииимɟɬɚɛолизмɚɚзоɬɚ

Инɫɬиɬɭɬɚ

ɛиоɯимии
имȺН� 0; ȻɚɯɚɎɟɞ&#x 025;ꀀɚльноɝо

ɝоɫɭɞɚɪɫɬɜɟнноɝо

ɭчɪɟжɞɟни&#x 027;退Ɏɟɞɟɪɚль&#x 000;ноɝо
иɫɫлɟɞоɜɚɬɟльɫкоɝо

цɟнɬɪɚ

©Ɏɭнɞɚмɟ&#x 026;瀦쀀ɚльныɟоɫноɜыɛиоɬɟɯ&#x 026;瀦耦倦耥퀀ииª
Ɋоɫɫийɫкой&#x 000; ɚкɚɞɟмии� 0; нɚɭк
,
ɝМоɫкɜɚ

ȿɪлыкинɚ&#x 023;лɟнɚИɜ&#x 025;ꀀноɜнɚ
-
ɞокɬоɪɛио&#x 026;倀оɝичɟɫки&#x 026; нɚɭк 6;逦ꀀоɮɟɫɫоɪ&#x 000;
зɚɜɟɞɭющɚя

кɚɮɟɞɪой 5;뀀иолоɝичɟɫкойɯимиии 6;怀ȽЯȽоɪоɞиɫɫко 6; 
Ƚоɫɭɞɚɪɫɬɜɟнноɝоɛюɞжɟɬноɝо

оɛɪɚзоɜɚɬɟ 6;倀ьноɝо

ɭчɪɟжɞɟния

ɜыɫшɟɝо
пɪоɮɟɫɫионɚ 6;倧怀ноɝооɛɪɚзоɜɚния©Нижɟɝоɪоɞɫ 6;䀀ɚяɝоɫɭɞɚɪɫɬɜɟннɚ 7;退мɟɞицинɫкɚя
ɚкɚɞɟмияª

Миниɫɬɟɪɫɬɜɚзɞɪɚɜооɯ 6;ꀥꀀнɟнияɊоɫɫийɫкойɎɟɞɟɪɚции

ȼɟɞɭщɚя&#x 026;耦ꀀɝɚнизɚц 6; я
Ɏɟɞɟɪɚльно 5;ɝоɫɭɞɚ 6;ꀦ뀀ɬɜɟнноɟ&#x 025;뀀юɞжɟɬноɟɭчɪɟжɞɟниɟ&#x 000;
нɚɭки
©Инɫɬиɬɭɬ
ɛиолоɝииКɚɪɟльɫкоɝ&#x 026;耀нɚɭчноɝо

цɟнɬɪɚ
ª
Ɋоɫɫийɫк 6;耦  ɚкɚɞɟм&#x 026; и
нɚɭк

Зɚщиɬɚ
диссертации
ɫоɫɬоиɬɫя
©ª

окɬяɛɪя

ɝɜ
14-00
чнɚзɚɫ&#x 000;ɟɞɚнии
Ⱦиɫɫɟɪɬɚционноɝоɫоɜ 5;ɬɚȾпɪи 4;ȽȻНɍ©НИИпиɬɚнияªпоɚɞɪɟɫɭ
:
ɝ&#x 000;Моɫкɜɚɍɫɬьинɫкий&#x 000; пɪоɟзɞɞ� 1;က

ɋɞиɫɫɟɪɬɚциɟйможноознɚкомиɬь 6;뀀яɜɛиɛл&#x 026;…耦쀀ɟкɟɎȽ 3;뀀Нɍ©НИИп&#x 026; ɬɚнияªинɚ
ɫɚйɬɟ
www.ion.ru
Ⱥɜɬоɪɟɮɟɪɚ 6;쀀ɪɚзоɫлɚн� a;退BBBªBBBBBBBBB

ɍчɟныйɫɟк 6;ꀥɬɚɪь

Ⱦиɫɫɟɪɬɚци 6;耦瀦瀦耥퀦耀 ɫоɜɟɬɚ

ɞокɬоɪɛиол&#x 026;耥퀀ичɟɫкиɯ

нɚɭк

ШилинɚН&#x 024;怀


Приложенные файлы

  • pdf 29736351
    Размер файла: 2 MB Загрузок: 0

Добавить комментарий