Чтобы посмотреть этот PDF файл с форматированием и разметкой, скачайте его и откройте на своем компьютере.
Направахрукописи
АБАЛЕНИХИНАЮЛИЯВЛАДИМИРОВНА
ОКИСЛИТЕЛЬНАЯМОДИФИ
КАЦИЯБЕЛКОВИ
ЛИЗОСОМАЛЬНЫЙЦИСТЕИ
НОВЫЙПРОТЕОЛИЗ
ИММУНОКОМПЕТЕНТНЫХО
РГАНОВКРЫСВУСЛОВИ
ЯХ
МОДУЛИРОВАНИЯСИНТЕЗ
АОКСИДААЗОТА
03.01.04
±
Биохимия
АВТОРЕФЕРАТ
диссертациинасоисканиестепени
кандидатабиологическихнаук
Рязань
-
2015
3
1.
Общаяхарактеристикаработы
1.1.
Актуальностьтемы
Белкивсилуособенностейсвоегостроенияявляютсяоднойизосновных
ловушекактивныхформкислородаиазотаобразующихсяподдействием
ионизирующейрадиациифотохимическихвоздействий
атакжевпроцессе
металл
-
зависимогоокисленияилирядаокислительно
-
восстановительныхреакций
ферментативнойинеферментативнойприродыДубининаЕЕПродуктом
токсическогодействиясвободныхрадикаловиактивныхформкислородаазота
являютсям
одифицированныебелкикоторыепредставляютсобойодиниз
мощныхэлементовклеточнойсигнализациииодновременноактивно
используютсядляхарактеристикиокислительногострессаýRODN(Всилу
широкойприроднойраспространенностибелковистабиль
ностипродуктових
окисленияоценкаокислительноймодификациивчастностикарбонилирования
протеиновсчитаетсянадежныммаркеромоксидативногоповрежденияДубинина
ЕЕМуравлеваЛЕидрВозможностьрегистрациисодержания
окисленных
белковкаквбиологическихжидкостяхтакивтканяхпривелак
накоплениюзначительногофактическогоматериалакоторыйдемонстрирует
изменениеуровнякарбонильныхпроизводныхприрядепатологических
состоянийИсмаиловаЖГДубининаЕЕПуст
ыгинаАВ
*ULPVUXG3$HWDOБелоноговРНидрНикитинаЮВМухина
ИВТолочкоЗССпиридоновВКВедуноваМВСазановАИ
КонторщиковаКНИвановВВидрОднаковнастоящеевремя
отсут
ствуетединыйметодологическийподходктрактовкерезультатовчто
затрудняетанализполученныхданных
Впоследниегодывкачествеодногоизагентовоксидативногостресса
рассматриваетсяэндогеннопродуцируемыйоксидазотаГраникВГГригорьев
НБ
&DODEUHVH9HWDOНаблюдающеесявнастоящеевремя
экспоненциальноенарастаниеисследованийвобластибиологииоксидаазота
привелокобнаружениюмножественностиегоэффектов7KLSSHVZDP\7HWDO
демонстрирующихкактоксическое6]D
E}&,VFKLURSRXORV+5DGL5
6HQHU$HWDOтакизащитное+XPPHO6*HWDO2]oXEXNoX6
(UJ•Q1,OKDQ(действиеэтой©универсальнойªмолекулыПриэтом
систематическиеисследованиявзаимоотношенийстимуляциииинг
ибирования
синтеза12сформированиемкарбонильныхпроизводныхнепроводились
Известночтомодифицированныеформыпротеиновболееподвержены
действиюпротеиназчемихнативныеаналогиПлешаковаОВЛущак
ВИДубинина
ЕЕПустыгина
АВ
Сдругойстороныклеточные
протеиназымогутстатьвозможнымимишенямидляповреждающегодействия
свободныхрадикаловчтосвойственнодругимферментам*ULPVUXG3$HWDO
2008).
Важнымобъектомисследованиймеханизмовответатканейна
окисли
тельноеповреждениеявляетсяиммуннаясистемадлякоторойхарактерно
наличиеспособностикгибкомуреагированиюнавнешниевоздействияс
одновременнымжесткимподдержаниемсобственногогомеостазаЗахаровАА
4
Наданныймоментдоказаноучастиевф
ормированиииммунногоответа
лизосомальныхцистеиновыхпротеиназ=KDQJ7HWDO.XHVWHU'HWDO
2005; Zavasnik
-
Bergant T., Turk B., 2007; Conus S., Hans
-
Uwe Simon, 2010; Watts
&иоксидаазота%RJGDQ&K,EL]D66HUUDGRU-0
, 2008; Pavanelli
:51RJXHLUD6LOYD--'DYLG$:LQNHWDO6LQJK$.в
качестверегуляторовОднакокарбонильныйстатусиммуннокомпетентных
тканейвусловияхизмененияпродукцииоксидаазотанеописан
Такимобразомпредставля
етсяактуальнымисследованиевлияни
я
измененияуровнясинтезаоксидаазотанапроцессыокислительногоповреждения
ираспадабелков
1.2.
Цельио
сновныезадачиисследования
Целью
настоящейработыявляетсяизучени
е
влиянияконкурентного
ингибитораисубстратасинтезаоксидаазотанасостояниеокислительной
модификациибелковилизосомальногоцистеиновогопротеолизатимусаи
селезенкикрыс
in vivo
и
in vitro
.
Задачиисследования
Провестикомплекснуюоценкусодерж
анияпродуктовокислительной
модификациибелковвтимусеиселезенкекрысвусловияхизменениясинтеза
оксидаазота
II
).
Описатьизмененияактивностилизосомальныхцистеиновыхкатепсинов
В
L
иНвизучаемыхмоделяхсоценкойингибиторноговлиянияи
аутокаталитическогопроцессинга
Проанализироватьзависимостьсостояниялизосомальногоцистеинового
протеолизаотстепениокислительноймодификациибелков
1.3.
Научнаяновизна
Впервыепредставленспособкомплекснойоценкисодержанияпродуктов
окислительноймодификациибелковвтканяхибиологическихжидкостях
позволившийобнаружитьувеличениеобщегосодержаниякарбонилированных
белковвусловиях
in
vivo
-
и
in vitro
-
ингибировани
ясинтезаоксидаазота
Установленонарастаниедоливторичныхмаркеровокислительногострессаи
истощениерезервно
-
адаптационногопотенциалаподдействиемконкурентного
ингибиторасинтезаоксидаазотаВпервыедоказаночтовоздействие1
-
нитро
-
L
-
аргининмет
иловогоэфира
(
L
-
NAME
)
приводиткповышениюактивности
лизосомальныхцистеиновыхпротеиназ
втимусеиселезенкепреимущественно
засчетвнелизосомальнойфракции
Показаночтосубстрат12
-
синтазы
-
L
-
аргининприизолированном
применениинеоказываетвлиян
иянаокислительнуюмодификациюбелкови
состояниелизосомальногопротеолизаиммунокомпетентныхоргановкрыс
.
Применение/
-
аргинина
вусловияхдефицитасинтезаоксидаазота
оказывает
корригирующеедействие
насостояниекарбониловогостатусаи
способствует
сохранениюэффекта/
-
1$0(дляактивностилизосомальныхцистеиновых
протеиназ
5
Впервыедоказановлияниеизмененияуровняоксидаазотана
аутопроцессингкатепсиновВ/иНпридефицитесинтеза12
±
преобладает
доляактивныхмолекулпримоделированииизбыт
касинтеза12
±
преобладает
доляпроэнзимов
Показаночтоц
истатинСневноситсущественноговкладав
регуляциюактивностикатепсиновВ/иНвусловияхизмененияуровнясинтеза
оксидаазота
Впервыебылавыявленаположительнаякорреляционнаявзаимосвяз
ьмежду
увеличениемколичествакарбонильныхпроизводныхбелковиактивностью
катепсинов/иНселезенки
1.4.
Теоретическаяип
рактическаязначимостьработы
Работаноситпреимущественнофундаментальныйхарактер
представленныевдиссертацииэкспериментальныеданныепозволяютпонять
рольсубстрата/
-
аргининиингибитора/
-
1$0(синтезаоксидаазотав
процессахмодификациибелковыхмолекулвсовокупностисиз
менением
активностилизосомальныхпротеиназчтоможетбытьиспользованодля
выяснениявозможныхпутейутилизациикарбонильныхпроизводныхбелков
П
атент©Способкомплекснойоценкисодержанияпродуктовокислительной
модификациибелковвтканяхибиологичес
кихжидкостяхªФоминаМА
АбаленихинаЮВФоминаНВТерентьевААприоритетотможет
бытьиспользованвобластиклиническойифундаментальнойбиохимиисцелью
определениястепенивыраженностиистадииокислительногостресса
источнико
вобразовавшихсякарбониловинаправленностивозможных
патологическихпоследствийпринакопленииокисленныхбелков
1.5.
Положениявыносимыеназащиту
1.
Внутрибрюшинноевведение/
-
1$0(вдоземгкгимгкгспособствует
окислительномукарбонилировани
юбелковиммунокомпетентныхоргановкрыс
in
vivo
и
in vitro
Пероральноевведение/
-
аргининавдоземгкгспособствует
снижениюуровнякарбонильныхпроизводных
2.
Моделированиедефицитасинтезаоксидаазотаспособствуетповышению
активностилизосомал
ьныхцистеиновых
протеиназвтимусеиселезенкевтом
числезасчетувеличениядолизрелыхформ
3.
Моделированиедополнительногосинтезаоксидаазотаневлияетнаактивность
лизосомальныхцистеиновыхпротеиназоднаковлияетнааутопроцессинг
катепсинов
4.
Применение/
-
аргининавусловияхдефицитасинтезаоксидаазотакорригирует
состояниекарбониловогостатусаприэтомдляизмененийактивности
лизосомальныхцистеиновыхпротеиназсохраняетсяэффект/
-
NAME.
5.
Междупроцессомокислительноймодификациибелковиактивностью
лизосомальныхцистеиновыхпротеиназ/иНвыявленаположительная
корреляционнаясвязьвусловияхмоделированиядефицитасинтезаоксидаазота
6
1.6.
Степеньдостоверностииа
пробацияработы
Достоверностьрезультатовработыподтверждаетсякорректным
использованиемтеоретическихиэкспериментальныхметодовобоснования
полученныхрезультатовивыводовДостоверностьэкспериментальныхданных
обеспечиваетсяиспользованиемсовременныхсредствимет
одикпроведения
исследованийПоложениятеорииосновываютсянаизвестныхдостижениях
фундаментальныхиприкладныхнаучныхдисциплинсопряженныхспредметом
исследованиядиссертации
Резу
льтатыисследованиядоложенына
научно
-
практическойконференции
моло
дыхученых©АспирантскиечтенияªРязаньХ,,региональной
научно
-
практическойконференциисмеждународнымучастием©Обменвеществ
приадаптациииповрежденииªРостов
-
на
-
ДонуХ,Хмежгородской
конференциимолодыхученых©Актуальныепроб
лемыпатофизиологииªСанкт
-
Петербург
М
еждународномсимпозиумепосвященном
-
летию
кафедрыбиохимииКазанскогоуниверситета©Биохимия
±
основанаукожизниª
Казань
М
еждународнойнаучно
-
практическойконференции©Актуальные
вопросыразвит
иянаукиªУ
фа
Хюбилейноймеждународной
конференции©Окислительныйстрессисвободнорадикальныепатологииª
ПицундаАбхазия
М
ежрегиональнойнаучнойконференцииуниверситета
смеждународнымучастиемРязань
В
торойрегиональнойконф
еренции
молодыхученых©ПутиинновационногоразвитияэкономикиРязанскойобластиª
Рязань
1.7.
Публикации
Потемедиссертацииопубликовано
7
печатныхработизних
±
в
журналахрекомендованныхВАКРФпатентнаизобретениеи
методические
реком
ендации
1.8.
Личныйвкладсоискателя
Всеизложенныевдиссертациирезультатыполученыавтором
самостоятельноилиприегонепосредственномучастииПостановказадач
интерпретацияполученныхрезультатовосуществлялисьсовместноснаучным
руководителемидругими
соавторамипубликаций
1.9.
Объёмиструктурадиссертации
Диссертационнаяработасостоитизвведенияобзоралитературы
материаловиметодовисследованиярезультатовисследованиязаключенияи
выводовСписоклитературысодержитисточниковизних
российскихи
зарубежныхОбъемработысоставляетстраницымашинописноготекста
содержитрисункови
5
таблиц
7
2.
МАТЕРИАЛЫИМЕТОДЫИССЛЕДОВАНИЙ
2.1.
Экспериментальныеживотные
Работавыполненанаконвенциональныхполовозрелыхкрысах
-
самцах
лини
и:LVWDUмассой
-
граммовЖивотныесодержалисьпо
-
особи
одногополавметаллическихклеткахплощадьюдм
2
приестественном
освещенииполучаливодуиполноценныйсухойкомбикормдлялабораторных
животных©ЧараªпроизводствоЗАО©Ассортимент
±
АгроªМосковская
областьСергиев
-
ПосадскийрайондТураковоПриготовлениекормовдля
животныхрасчетрационао
существлялсясотрудникамививариявсоответствиис
установленныминормами
Наоснованииэтическойэкспертизыпланируемыхв
диссертационнойработеисследованийналабораторныхживотныхлокальн
ым
этическ
им
комитет
ом
ГБОУВПОРязГМУМинздрава
России
принято
п
оложительноезаключениепротокол№от
г
).
2.2.
Экспериментальныемодели
Длямоделированиядефицитасинтезаоксидаазотаосуществляли
внутрибрюшинноевведение
раствора
неселективногоингибитора12
-
синтазы1
-
нитро
-
L
-
аргининметиловогоэфира/
-
NAM
(©6LJPDªСША
нарастворе
1D&Oвдозе
мгкг
(
Покровский
МВ
, 2008).
Препаратвводилсяразвсуткив
утренниечасыежедневновтечениеднейВыведениеизэксперимента
осуществлял
ось
на
-
есутки
Моделированиеизмененияуровнясинтезаоксида
азота,,субстратом12
-
синтазыосуществлялипутемвнутрижелудочноговведенияраствора/
-
аргинина
©6LJPDªСШАнарастворе1D&Oвдоземгкг
(
Дорохина
ЛВЗинчук
ВВ
, 2000).
Препаратвводилиразвсуткидоутреннегокормленияежедневно
в
течениеднейВыведениеизэкспериментаосуществлялина
-
есутки
Дляизучениякорригирующегодействия/
-
аргининаосуществляли
внутрибрюшинноевведе
ние/
-
1$0(вуказанныхдозахс
4
-
х
по
-
есуткина
фонепероральноговведения/
-
аргининаЖивотныхвыводилиизэксперимента
на
-
есутки
Контрольныегруппыформировалисьдлякаждойсерииэкспериментаиз
животныхсопоставимыхповозрасту
полу
массеиусловиямсодержанияс
эксперимент
альнымиособямиЖивотнымконтрольнойгруппыосуществляли
введениефизиологическогораствораприэтомвариантвведенияобъемы
раствораипродолжительностьвоздействиясовпадаютстаковы
мидля
экспериментальнойгруппы
.
Длямоделированиядефицитасинтеза
оксидаазота,,
in vitro
производили
инкубациюсвежевыделенныхтимоцитовиспленоцитоввполнойпитательной
средесодержащеймМ/
-
NAME
(
Стариков
ЮВ
, 2008
)
втечениечасовпри
температуре
0
С
Длямоделированияизмененияуровнясинтезаоксидаазо
та,,
in vitro
производилиинкубациютимоцитовиспленоцитоввполнойпитательнойсреде
содержащеймМ/
-
аргинин
(
Стариков
ЮВ
, 2008
)
втечениечасовпри
температуре
0
С
8
Контрольныегруппыформировалисьдлякаждойсерииэкспериментаиз
тимоцитов
испленоцитовинкубированныхпараллельноопытнымпробамв
полнойпитательнойсредевтечениечасовпритемпературе
0
С
2.3.
Определениеконцентрацииметаболитовоксидаазота
Содержаниеметаболитовоксидаазотаопределяливнеседиментируемой
фракции
гомогенатаспектрофотометриейввидимойобластиспектрапореакции
среактивомГрисса
(
Метельская
ВАГуманова
НГ
, 2005)
.
Уровеньметаболитов
оксидаазотасуммарнуюконцентрациюнитратовинитритов
NO
х
)
определяли
спектрофотометрическимметодомпоокр
аскевреакциидиазотирования
нитритомсульфаниламидавходящеговсоставреактиваГриссаИнтенсивность
окраскиопределяливвидимойобластиспектрасрегистрациейна
микропланшетноманализаторе6WDW)D[$ZDUHQHVV7HFKQRORJ\СШАпри
дл
иневолны
нмивыражаливнм
ольмгбелка
2.4.
Методопределениясодержаниябелка
Содержаниебелкаопределяливседиментируемойинеседиментируемой
фракцияхгомогенатапометодуЛоурикоммерческимнаборомНПЦ©Эко
-
сервисªСанкт
-
Петербург
2.5.
Методопределениякислойф
осфатазы
Активностькислойфосфатазыопределяливседиментируемойи
неседиментируемойфракцияхгомогенатаунифицированнымметодомпо
©конечнойточкеªиспользуякоммерческийнабор©ВиталДиагностиксСПбª
Санкт
-
Петербург
Количествообразовавшегосяведин
ицувремени
n
-
нитрофенолапропорциональноеактивностиферментаопределяетсяпо
оптическойплотностиобразцапринм
2.6.
Методопределенияактивностилизосомальныхцистеиновыхпротеиназ
АктивностькатепсиновВ
L
иНизучаласьспектрофлуориметрическим
методом
System
3
Scanning
Spectrofluorometr
,
Optical
technology
devices
,
NewYork
)
по
Barrett
&
Kirschke
(
Barrett
A
.
J
.,
Kirschke
H
.
, 1981
).
Удельную
активностькатепсиноввтимусеиселезенкевыражаливнмольами
д
о
-
метилкумаринасек
гбелка
2.7.
Методопределениестепениаутокаталитическогодействиякатепсинов
Длявыявленияаутокаталитическогодействиякатепсинов
,
реакционную
смесьвключающуюмМДТТмМЭДТАимлисследуемогоматериала
преинкубироваливтечениеминутпри
0
СПосле
этогокнейдобавляли
мкМ
1Į
-
CBZ
-
Arg
-
Arg
-
7
-
amido
-
4
-
methylcoumarin
длякатепсинаВ
N
-
CBZ
-
Phe
-
Arg
-
7
-
амидо
-
4
-
метилкумаринадлякатепсина
L
и
Arg
-
7
-
amido
-
4
-
methylcoumarin
длякатепсинаНиинкубировалиминутпри
0
C
Борискина
МА
, 1996)
.
Аутокаталитическоедействиекатепсиновоценивалосьпокоэффициенту
отношениязначенияактивностиферментапослепрекаталитическойинкубациик
9
параллельноопределяемомузначениюактивностибезпреинкубации
K
aca
±
коэффициентаутокаталитическогодействия
2.8.
Методоценкиокислительноймодификациибелковвтканях
Дляоценкиокислительноймодификациибелковиспользовалиопределение
уровнякарбонильныхпроизводныхпо
методу
R
.
L
.
Levine
вмодификацииЕЕ
Дубининой
ДубининаЕЕ
идр
, 1995
).
Методоценки
окислительной
модификациибелковоснованнареакциивзаимодействиякарбонильных
производныхокисленныхаминокислотныхостатковбелк
овс
-
динитрофенилгидразином
(2,4
-
ДНФГ
собразованием
-
динитрофенилгидразоновкоторыерегистрировалисьспектрофотомет
рически
По
полученнымрезультатамподсчитывали
площадьподкривойспектрапоглощения
продуктов
окислительноймодификациибелков
,
которая
складывалась
из
площадейподкривой
альдегид
-
динитрофенилгидразоновАДНФГикетон
-
динитрофенилгидразоновКДНФГ
Па
т
РФМПК
G
01
N
Способ
комплекснойоценкисодержанияпродуктовокислительноймодификациибелков
втканяхибиологи
ческихжидкостяхФоминаМА
идрРязгосмедун
-
тим
ИППавлова
±
заявлопубл
.07.201
Бюл№
±
с
Далееполученноезначениевыражаливусловныхединицахграммбелка
2.9.
Способоценкидолипервичныхивторичныхмаркеров
окислительногостресса
Дляоценкидолипервичныхмарк
еровподсчитываласьсуммаАДНФГ
для
оценкивторичных
-
суммаКДНФГисоотносилась
с
общ
им
содержани
ем
карбонильныхпроизводныхбелков
S
общ
).
2.10.
Способоценкирезервно
-
адаптационногопотенциала
Оценкарезервно
-
адаптационногопотенциалапроизводиласьпутем
подсчетаотношенияплощадиподкривойкарбонильныхпроизводныхбелковпри
спонтанномокислениипротеиновкиндуцированномупореакцииФентона
принимаяКДНФГ
инд
иАДНФГ
инд
за
(
Никитина
ЮВМухина
ИВ
.
, 2009)
.
2.11.
Статистическаяобработкаданных
Статистическийанализре
зультатовисследованияпроведен
с
использованиемпрограммы©0LFURVRIW2IILFH([FHOªи©6WDWLVWLFD
ª
Проверкунормальностираспределенияданныхосуществлялиспомощью
критерияШапиро
-
Уилка:
-
критерий
Р
езультатыпредст
авляливформатеМе
>PLQPD[@где
Ме
-
медиан
а
, min
-
минимальноеиPD[
-
максимальное
значение
Д
ляоценкистатистическойзнач
имостиразличийнезависимыхвыборок
использовалиранговыйкритерийМанна
-
Уитни
U
-
тест
Дляпроверкиравенства
медианнесколькихвыборокиспользоваликритерийКраскела
-
Уоллиса
Для
оценкиранговойкорреляциииспользоваликоэффициентСпирмена
Критический
уровеньзначимостинулевойстатистическойгипотезырпринималиравны
м
0,05.
10
3.
Результатыиобсуждение
3.1.
Х
арактеристик
аэкспериментальныхмоделей
Дляподтвержденияэффектаконкурентногоингибитораисубстрата
NO
-
синтазы
осуществлялиизмерениеуровняметаболитовоксидаазотатабл
Таблица
1
Концентрацияметаболитовоксидаазота
в
тимус
е
иселезенк
е
крысв
моделях
in
vivo
Ме
[
min
;
max
]
экспериментальнаямодель
тимус
селезенка
контроль
16,9 [10,9;
23,6]
10,6 [9,0; 18,9]
L
-
NAME
мгкг
15,2 [11,7; 19,9]
8,3 [6,6; 9,1]
* (p=0,019)
контроль
17,9 [9,1; 31,5]
12,9 [10,5; 20,7]
L
-
аргининмгкг
>@ р
21,1[15,1;27,2]
*
р
контроль
15,8 [11,7; 24,9]
9,8 [8,5; 19,1]
L
-
1$0(мгкг
L
-
аргининмгкг
13,2 [9,8; 34,6]
^
р
12,1 [9,4; 14,2]
^
p=0,008
Примечание
: *
-
статистическизначимыеотличияотносительногруппыконтроля
^
-
статистическизначимыеотличияотносительногруппы
L
-
аргинин
Вусловиях
in
vitr
о
-
моделированиядефицитасинтезаоксидаазота
концентрация
NO
2
̄
и
NO
3
̄
втимоцитахиспленоцитахснижаетсяапри
дополнительномвнесениисубстратавпитательнуюсреду
±
повышаетсятабл
Таблица
2
Концентрацияметаболитовоксида
азотанмольмгбелкавтимоцитахи
спленоцитахкрысвусловиях
in
vitro
-
моду
лированиясинтезаоксидаазота
экспериментальнаямодель
тимоциты
спленоциты
Контроль
24,9
[
20,4; 32,7
]
6,11
[
5,7; 8,81
]
L
-
аргининмМ
40,0
[
35,1; 42,1
]
*
(
p
=0,01)
32,7
[
24,9;3
8,9
]
*
(
p
=0,01)
L
-
NAME (5
мМ
)
15,4
[
12,7; 17,3
]
*
(
p
=0,03)
4,9
[
4,3; 5,7
]
*
(
p
=0,04)
Примечание
: *
-
статистическизначимыеотличияотносительногруппыконтроля
Жизнеспособностьсвежевыд
еленыхтимоцитовсоставила“
2,8 %,
послеинкубациижизнеспособностьконтрольнойгруппытимоцитов
незначите
льноснизиласьисталаравна“
S При
in vitro
-
моделированиидополнительногосинтезаоксидаазотасубстратом/
-
аргинин
данныйпоказательстатистическизначимоне
изменилсяисоставил“
S однакодобавлениемМ/
-
1$0(винкубационнуюсредуспособствует
уменьшениюжизнеспособностиклетокпосравнениюсосвежевыделенными
клеткамииинкубированнымконтролем
-
“р
Длясвежевыделенных
спленоцитовжизнеспособностьклетоксоставила
“послеинкубациивполнойпитательнойсреденезначительно
снизилсядо“S Добавлениеаргининавпитательнуюсредуне
способствуетизменениюжизнеспособностиклеток
±
“
S а
внесение/
-
1$0(мМприводиткстатистическизначимомууменьшению
жизнеспособности
±
“S
11
3.2
.
Оценкасостоянияо
кислительноймодификациибелков
Характеристикаокислительногокарбонилированиябелковпод
действиемконку
рентногоингибиторасинтезаоксидаазота
±
L
-
NAME
Внутрибрюшинноевведение
L
-
NAME
приводиткстатистическизначимому
увеличениюобщейплощади
под
кривой
спектрапоглощенияпродуктов
окислительноймодификациибелковселезенкикрысзасчетстатистически
значимого
повышенияколичестваальдегид
-
икетон
-
динитрофенилгидразонов
основногохарактера
придоземгкг
(
рис
)
.
Примечание
: *
-
статистическизначимыеотличияотносительноконтроляр
0,05)
Рис
1
.
Сравнительныйанализспектрапоглощенияпродуктов
окислительноймодификациибелковселезенкиподдействием
L
-
NAME
вдозе
мгкг
Обнаруженные
in
vivo
измененияподтверждаютсявэксперименте
in
vitr
o
рис
).
Примечание
: *
-
статистическизначимыеотличияотносительноконтроляр
0,05)
Рис
2
.
Сравнительныйанализспектрапоглощенияпродуктов
окислительноймодификациибелковспленоцитовкрысподдействиеммМ
L
-
NAME
in
vitro
Втимусеп
оддействием
L
-
NAME
in
vivo
вдоземгкг
наблюдается
тенденция
к
увеличени
юсодержаниякарбонильныхпроизводных
белководнако
,
статистическизначимыхразличийнеотмечается
(
рис
).
λ(нм
)
L
-
NAME
(5
мМ)
Ğ.Ž.п./
гбелка
λ(нм)
230 254
270 280
356
363 370
428
430 434
520 535
S
АДНФГн.
S
КДНФГн.
S
АДНФГо.
S
КДНФГо.
S
общ.
контроль1
5,1 [2,2; 9,6]
1,6 [0,24; 4,8]
0,4 [0,3; 0,9]
0,06 [0,03; 0,12]
6,69 [3,8; 14,9]
>-ED(25мг/кг)
3,6 [2,7; 10,5]
2,7 [1,1; 5,5]
2,8 [2,2; 5,9]*
0,6 [0,4; 1,4]*
10,9 [7,2; 23,5]*
p = 0,072
p = 0,68
p = 0,11
p = 0,002
p = 0,001
0
0,01
0,02
0,03
0,04
0,05
0,06
e.o.
п
./
г
белка
e.o.n./
г
белка
230 254
270 280
356
363 370
428
430 434
520 535
S
АДНФГн.
S
КДНФГн.
S
АДНФГо.
S
КДНФГо.
S
общ.
контроль
15,8 [15,6; 20,5]
7,4 [4,5; 9,8]
6,5 [4,7; 9,7]
1,1 [0,8; 1,7]
33,4 [25,7; 39,4]
L-Name (5
мМ)
25,7 [11,7; 44,9]
10,6 [7,1; 31,8]
23,5 [9,8; 44,9]*
4,7 [2,1; 8,0]*
72,1 [31,3; 129,8]*
0,037
p = 0,76
p = 0,23
p = 0,037
p = 0,037
0
0,05
0,1
0,15
0,2
0,25
0,3
0,35
12
Рис
3
.
Сравнительныйанализспектрапоглощенияпродуктов
окислительноймодификациибелков
тимуса
экспериментальнойгруппы
под
действием
L
-
NAME
вдозе
мгкг
С
труктурнаяорганизациякровяногоруслатимусаорганоспецифичнаи
находитсявпрямойзависимостиотстр
оениясоединительнотканногокаркасаВ
своюочередь1
-
нитро
-
L
-
аргининметиловыйэфирспособствуетсужениюсосудов
чтоможет
затруднитьб
иодоступност
ь
данноговеществадлявилочковойжелезы
Предположениеоботсутствииизменений
in
vivo
попричинеслабой
б
иодоступности
L
-
NAME
втканьтимус
а
подтверждаетсявэксперименте
in
vitro
.
Такв
тимоцит
ах
инкубированныхвполнойпитательнойсредес
внесениеммМ
L
-
1$0(былоотмеченостатистическизначимоеповышениеобщейплощадипод
кривойотно
сительноконтрольногозначения
рис
4
).
Примечание
: *
-
статистическизначимыеотличияотносительноконтроляр
0,05)
Рис
4
.
Сравнительныйанализспектрапоглощенияпродуктов
окислительноймодификациибелков
тимоцитов
крыс
поддействиеммМ
L
-
NAME
in
vitro
Вусловиях
in
vivo
-
и
in
vitro
-
моделированиядефицитасинтезаоксидаазота
вселезенкедолявторичныхмаркеровстатистиче
скизначимовозрасталавтимусе
данныйпоказательнеизменялся
(
табл
Такимобразомможнопредположитьчтодляселезенкивусловиях
моделированиядефицитасинтезаоксидаазотамишенямидляповреждающих
агентовявляютсяостаткиаминокислотосновного
характераДлятимусатакой
специфичностиотмеченонебыло
L
-
NAME
(5
мМ)
e.o.
п
./
гбелка
λ(нм)
λнм.
230 254
270 280
356
363 370
428
430 434
520 535
S
АДНФГн.
S
КДНФГн.
S
АДНФГо.
S
КДНФГо.
S
общ.
контроль1
29,2[20,6;53,7]
L-NAME
(25мг/кг)
33,6 [22,5;80,1]
p = 0,19
P = 0,31
p = 0,31
p = 0,15
p = 0,15
12,65 [8,9; 26,3]
14,08 [10,5; 40,8]
7,2 [4,8; 15,5]
6,8 [4,4; 14,9]
7,8 [5,9; 15,9]
10,7 [6,4; 20,5]
1,7 [1,3; 3,2]
1,9 [1,1; 3,8]
0
0,05
0,1
0,15
0,2
0,25
0,3
0,35
e.o.
п
./
г
белка
13
Таблица
3
Доляпервичныхивторичныхмаркеровокислительногострессавселезенкеи
тимусекрысвусловиях
in
vivo
-
и
in
vitro
-
моделирования
дефицитасинтезаоксидаазотаМе
[
min
;
max
]
Доля
первичных
маркеров
Долявторичных
маркеров
селезенка
Контроль
78,4 [56,2; 85,5]
20,6 [10,1; 35,6]
L
-
NAME
мгкг
>@ р
>@ р
Контроль
in vitro
75,7 [67,2; 79,0]
24,3 [21,8; 30,6]
L
-
NAME
мМ
69,5
[
60,1;
75,9
]
р
30,5
[24
,1; 36,8
]
р
тимус
Контроль
73,6
[
70,9; 75,8
]
26,4
[
24,6; 31,1
]
L
-
NAME
мгкг
74,9 [70
,1; 78,9
]
25,1 [21
,1; 29,9
]
Контроль
in
vitro
76,2
[65
,4; 78,6
]
23,8
[20
,1; 26,5
]
L
-
NAME 5
мМ
77,3
[
68,7; 80,4
]
22,7
[
19,8; 27,4
]
Примечание
: *
-
статистическизначимыеотличияотносительногруппыконтроля
Характеристикаокислительногокарбо
нилированиябелковпод
влиянием
субстратасинтезаоксидаазота
±
L
-
аргинина
Влияниеизолированноговведения
L
-
аргининанаформирование
карбонильныхпроизводныхбелков
Поддействием
L
-
аргинина
in
vivo
(
риси
in
vitro
рис
общаяплощадь
подкривойокислительноймодификациибелковселезенкинеизменяется
относительноконтроляоднакоспектрпоглощенияпродуктовпретерпевает
изменения
Примечание
:
*
-
статистическизначимыеотличияотносительноконтроляр
Рис
5
Сравнительныйанализспектрапоглощенияпродуктов
окислительноймодификациибелковселезенкиподвлиянием
L
-
аргинина
Примечание
:
*
-
статистическизначимыеотличияотносительноконтроляр
Рис
6
Сравнительныйанализспектрапоглощенияпро
дуктовокислительной
модификациибелковспленоцитовподвлияниеммМ
L
-
аргинина
in
vitro
λ(нм)
230 254
270 280
356
363 370
428
430 434
520
535
S
АДНФГн.
S
КДНФГн.
S
АДНФГо.
S
КДНФГо.
S
общ.
контроль2
5,2 [2,5; 9,4]
1,2 [0,3; 5,4]
0,5 [0,3; 1,0]
0,06 [0,04; 0,1]
6,3 [3,2; 13,6]
>-аргинин
(500мг/кг)
4,0 [0,07; 6,1]*
1,2 [0,2; 1,8]
0,7 [0,2;1,8]*
0,2 [0,1; 0,5]*
6,9 [1,0; 10,0]
p = 0,7
p = 0,025
p = 0,64
p = 0,057
p = 0,0035
0
0,01
0,02
0,03
0,04
0,05
0,06
e.o.
п
./
г
белка
λ(нм)
230 254
270 280
356
363 370
428
430 434
520
535
S
АДНФГн.
S
КДНФГн.
S
АДНФГо.
S
КДНФГо.
S
общ.
контроль
6,5 [4,7; 9,7]
33,4 [25,7; 39,4]
>-аргинин
(5мМ)
5,8 [2,9;22,4]
18,4 [12,9; 81,1]
p = 0,76
p = 0,36
p = 0,045
1,1 [0,8; 1,7]
2,6 [0,5; 5,4]*
15,8 [15,6; 20,5]
7,7 [6,6; 17,5]*
P = 0,045
7,4 [4,5; 9,8]
4,7 [1,8; 17,2]
p = 1,0
0
0,05
0,1
0,15
0,2
0,25
0,3
e.o.
п
./
г
белка
14
Втимусекрысвсвоюочередьпроявляетсячеткийантиоксидантный
эффектдействия
L
-
аргинина
in
vivo
(
риси
in
vitro
рис
).
Примечание
:
*
-
статистическизначимыеотличияотносительноконтроляр
Рис
7
Сравнительныйанализспектрапоглощенияпродуктов
окислительноймодификациибелковтимусаподвлиянием
L
-
аргинин
in
viv
o
Примечание
:
*
-
статистическизначимыеотличияотносительноконтроляр
Рис
8
Сравнительныйанализспектрапоглощенияпродуктов
окислительноймодификациибелковтим
o
цитовподвлиянием
L
-
аргинина
Вусловияхстимулированиясинтезаоксидаазотаобщееколичество
карбонильныхпроизводныхбелковнеизменяетсяотносительнозначений
контрольнойгруппыОднако
,
изменяетсяструктураспектрапоглощения
продуктовокислительноймодификациибелковселезенкиснижаетсяколичество
АДНФГнейтральногохарактераповышаетсясод
ер
жаниеКДНФГосновного
характера
Длятимусапрослеживаетсятенденцияснижениясодержания
карбонильныхпроиз
водныхбелковРазнонаправленностьизменений
окислительногостатусаиммунокомпетентныхоргановможетобъяснятьсяразным
белковымсоставомтимусаи
селезенкитоестьцитопротекторныйи
цитотоксическийэффектоксидаазотавозможноопределяетсяего
взаимодействиемсдоступнымимишенями
Использование
L
-
аргининавусловияхэкспериментальногодефицита
синтезаоксидаазота
Присочетанномприменении
L
-
NA
ME
мгкги
L
-
аргининаобщая
площадьподкривой
спектра
поглощенияпродуктовокислительноймодификации
белковселезенкистатистическизначимонеотличаетсяотзначенийконтрольной
группы
табл
4
).
Длятимусаотмечаласьнесколькоинаятенденциязначен
и
е
общейплощадиподкривойспектрапоглощенияпродуктовокислительной
λ(нм)
230 254
270 280
356
363 370
428
430 434
520
535
S
АДНФГн.
S
КДНФГн.
S
АДНФГо.
S
КДНФГо.
S
общ.
контроль
28,4[20,6;53,7]
>-аргинин
(5мМ)
20,9[6,8;32,8]
p = 0,13
8,4 [3,7; 17,9]
13,05 [9,1; 24,3]
1,2 [0,3; 1,9]
1,4 [0,9; 2,7]
7,3 [5,1; 14,08]
6,1 [1,2; 8,4]*
6,2 [4,4; 12,5]
5,2 [1,5; 6,5]*
p = 0,09
p = 0,02
p = 0,023
p = 0,12
0
0,02
0,04
0,06
0,08
0,1
0,12
e.o.
п
./
г
белка
λ(нм)
230 254
270 280
356
363 370
428
430 434
520
535
S
АДНФГн.
S
КДНФГн.
S
АДНФГо.
S
КДНФГо.
S
общ.
контроль
27,5 [20,9; 44,8]
>-аргинин
(5мМ)
10,9 [3,4; 18,8]*
p=0,03
15,5 [12,1; 25,1]
4,2 [2,08; 8,7]*
5,5 [3,3; 8,1]
2,4 [0,7; 4,9]*
0,6 [0,08; 1,3]
1,03 [0,8; 1,9]
2,7 [0,5; 5,5]
5,2 [3,1; 11,6]
p=0,03
p=0,05
p=0,31
p=0,66
0
0,02
0,04
0,06
0,08
0,1
0,12
0,14
0,16
0,18
e.o.
п
./
г
белка
15
модификациибелков
статистическизначимоснижается
относитель
нозначений
контрольнойгруппызасчетАДНФГ
и
КДНФГ
нейтральногохарактера
табл
4
).
Таблица
4
Значенияплощадипод
к
ривойспектрапоглощениякарбонильныхпроизводных
белков
селезенки
итимуса
вусловияхкорригирующегодействия/
-
аргинина
селезенка
тимус
Контроль
L
-
аргининмгкг
+
L
-
NAME
мгкг
Контроль
L
-
аргининмгкг
+
L
-
NAME
мгкг
S
АДНФГн
4,0
[2,7; 10,01]
3,2 [1,9; 6,8]
13,9 [10,6; 26,1]
3,2 [2,2; 7,1]*p=0,001
S
КДНФГн
1,1 [0,32; 5,9]
1,4 [0,8; 2,1]
6,9 [5,6; 14,5]
3,8 [0,8; 6,3]*p=0,005
S
АДНФГо
0,32 [0,28; 1,51]
1,1 [0,7; 1,6]
7,8 [4,9; 13,1]
6,1 [1,1; 13,6]
S
КДНФГо
0,05 [0,03;
0,32]
0,2 [0,1; 0,3]
1,7 [0,8; 3,1]
1,3 [0,3; 2,8]
S
ОБЩ
6,57 [3,9; 14,4]
6,09 [4,8; 10,05]
29,8 [20,6; 53,7]
13,7[5,4;29,9]*p=0,009
Примечание
:
*
-
статистическизначимыеотличияо
тносительноконтроляр
Дляселезенкиобщаяплощадьподкривойокислительноймодификации
белковвэкспериментальнойгруппесочетанногоприменения
L
-
NAME
нафоне
L
-
аргининанижеотносительногруппы
L
-
NAME
инеотличаетсяотзначений
группы
L
-
аргининчтосвидетельствуетокорригир
ующемдействииаргининапри
использовании
L
-
NAME
вдоземгкг
рис
9
).
Примечание
: #
-
статистическизначимыеотличияотгруппы/
-
1$0(мгкг
(p0,05)
РисСравнительный
анализспектрапоглощенияпродуктов
окислительноймодификациибелковселезенкиэкспериментальнойгруппы/
-
1$0(мгкгнафоне/
-
аргининаотносительногруппы/
-
1$0(мгкги
L
-
аргинин
Прииспользовании/
-
NAME
мгкг
нафоне/
-
аргининаотмечает
ся
статистическизначимоеснижениеобщейплощадиподкривой
спектра
поглощенияпродуктовокислительноймодификациибелковотносительногруппы
L
-
NAME
засчетстатистическизначимогоснижениясодержанияАДНФГи
КДНФГнейтральногохарактераи
АДНФГосновного
характера
рис
λнм.
230 254
270 280
356
363 370
428
430 434
520 535
S
АДНФГн.
S
КДНФГн.
S
АДНФГо.
S
КДНФГо.
S
общ.
>-аргинин
(500мг/кг)
1,2 [0,2; 1,8]
0,7 [0,2;1,8]
0,2 [0,1; 0,5]
6,9 [1,0; 10,0]
>-EĂŵĞ(25мг/кг)
2,7 [1,1; 5,5]
2,8 [2,2; 5,9]
0,6 [0,4; 1,4]
10,9 [7,2; 23,5]
>-ED(25мг/кг)
+>-аргинин(500мг/кг)
1,4 [0,8; 2,1]
#
1,1 [0,7; 1,6]
#
0,2 [0,1; 0,3]
6,09[4,8;10,05]
#
#
p = 0,007
3,2 [1,9; 6,8]
3,6 [2,7; 10,5]
4,0 [0,07; 6,1]
#
p = 0,014
#
p = 0,001
#
p = 0,001
0
0,01
0,02
0,03
0,04
0,05
0,06
е.о.п./гбелка
16
Примечание
: ^
-
статистическизначимыеотличияотгруппы
L
-
аргинина
p
0,05);
#
-
статистическизначимыеотличияотгруппы
L
-
NAME
мгкг
p
0,05)
Рис
Сравнительныйанализспектрапоглощенияпродуктов
окислительноймодификациибелковтимусаэкспериментальнойгруппы
L
-
NAME
мгкгнафоне
L
-
аргининаотносительногруппы
L
-
NAME
мгкги
L
-
аргинин
Дляоценкиустойчивостибелковкповреждающемувозде
йстви
ю
используетсяреакцияФентона
широкопримен
яе
мая
,
какисточник
гидроксильныхрадикалов
Вусловияхм
оделированиядефицитасинтезаоксида
азотанаблюдалосьистощениерез
ервно
-
адаптационногопотенциаласелезенки
преимущественнозасчетдинитрофенилгид
разоновосновногохарактера
рис
11)
.
Примечание
: *
±
статистическизначимыеотличияо
тконтрольнойгруппыр
Рис
11
.
Состояниерезервно
-
адаптационногопотенциала
динитрофенилгидразоновселезенкивусловиях
in
vivo
-
моделированиядефицита
синтезаоксидаазота
λнм.
230 254
270 280
356
363 370
428
430 434
520 535
S
АДНФГн.
S
КДНФГн.
S
АДНФГо.
S
КДНФГо.
S
общ.
>-аргинин
(500мг/кг)
20,9[6,8;32,8]
>-EĂŵĞ(25мг/кг)
33,6 [22,5;80,1]
>-ED(25мг/кг)
+>-аргинин(500мг/кг)
13,7[5,4;29,96]
#
#
p = 0,002
3,2 [2,2; 7,1]^
#
3,8 [0,8; 6,3]
#
6,1 [1,1; 13,6]
#
1,3 [0,3; 2,8]
8,4 [3,7; 17,9]
5,2 [1,5; 6,5]
6,1 [1,2; 8,4]
1,2 [0,3; 1,9]
14,08 [10,5; 40,8]
6,8 [4,4; 14,9]
10,7 [6,4; 20,5]
1,9 [1,1; 3,8]
#
p=0,001; ^ p = 0,02
#
p = 0,003
#
p = 0,04
0
0,05
0,1
0,15
0,2
0,25
0,3
0,35
е.о.п./г.белка
17
Поддействиемингибиторасинтезаоксидаазота
in
vivo
отмечается
тенденцияистощениярезервно
-
адаптационногопотенциалатимусазасчет
АДНФГ
нейтрального
харак
терарис
1
2
).
Уровеньрезервно
-
адаптационного
потенциалаувеличивается
по
ддействием
L
-
аргининаатакже
относительно
значенийконтрольнойгруппы
присочетанномприменении
L
-
NAME
и
L
-
аргинина
чтоуказываетнаположительноевлияние
L
-
аргинина
Примечание
: *
±
статистическизначимыеотличияот
контрольнойгруппыр
0,05)
Рис
1
2
.
Состояниерезервно
-
адаптационногопотенциала
динитрофенилгидразонов
тимусавусловиях
in
vivo
-
моделированиядефицита
синтезаоксидаазота
Изполученныхрезультатовследуетчтовусловияхдефицитасинтеза
оксидаазотазначениерезервно
-
адаптационногопотенциаласнижается
относительнопоказателейконтрольнойгруппыПолученнаятенденция
истощениярезервно
-
адаптационногопотенциалаиммунокомпетентныхорганов
можетсвидетельствоватьонедостаточнойактивностиантиоксидантныхсистеми
накоп
ленииповрежденныхимеющихслабуюфункциональнуюактивность
белков
3.2
.
Оценкасостояниялизосомальногоцистеиновогопротеолиза
Протеолитическиесистемыспособныудалятьповрежденныебелкиименно
поэтомуих
можно
рассматриват
ь
каквт
оричныеантиоксидантн
ыесистемы
.
Изучениеактивностипроте
ин
азвусловияхокислительногострессаважнодля
пониманияпроцессаобновлениябелков
Внутрибрюшинноевведение/
-
1$0(вдоземгкглабораторным
животнымвтечениеднейприводиткувели
чениюобщейактивности
катепсинов
В
,
L
иН
селезенкиотносительноконтролязасчетувеличения
несед
иментируемой
активностирис
.
1
3)
.
18
Примечание
:
*
-
статистическизначимыеотличияо
тносительноконтроляр
Рис
1
3
.
АктивностькатепсиновВ
L
иНселезенкивусловиях
in
vivo
-
ингибирования
синтезаоксидаазота
АктивностькатепсиновВ
L
Нтимусанеизмениласьотносительно
значенийконтрольнойгруппыподдействием
L
-
NAME
вдоземгкг
(
рис
Рис
4
.
АктивностькатепсиновВ
L
иН
тимуса
вусловиях
in
vivo
-
ингибирования
синтезаоксидаазота
Внутрижелудочноевведение
L
-
аргининавдоземгкгвтечениедней
невызывалостатистическизначимыхизмененийактивностикатепсиновВ
L
Н
селезенкиитимусазначениянеседиментируемойседиментируемойиобщей
ак
тивностейблизкикзначениямданных
показателейконтрольнойгруппы
РисАктивностькатепсиновВ/иНселезенкивусловиях
in vivo
-
стимуляциисинтезаоксидаазота
19
РисАктивностькатепсиновВ
L
иНтимусавусловиях
in
vivo
-
стимуляции
синтезаоксидаазота
Вусловиях
in vitro
-
моделированиядефицитасинтезаоксидаазота
отмечаетсяоднонаправленнаятенденциядляспленоцитовитимоцитов
увеличени
еобщейактивностикатепсинов
/иНотносительнознач
ений
контрольнойгруппы
рисирис
В
условиях
in
vitro
-
моделированиядополнительногосинтезаоксидаазота
статистическизначимыхразличий
активностикатепсиновВ
L
иН
спленоцитови
тимоцитов
относительнозначенийконтрольнойгруппыотмеченонебыло
.
Примечание
*
-
статистическизначимые
отличияотконтрольнойгруппыр
РисАктивностькатепсинов
В
L
иНспленоцитоввусловиях
in
vitro
-
моделированиядефицита
синтезаоксидаазота
Примечание
: *
-
статистическизначимые
отличияотконтрольнойгруппыр
РисАктивностькатепсиновВ
L
иНтимоцитоввусловиях
in
vitro
-
моделированиядефицитасинтезаоксида
азота
20
РисАктивностькатепсиновВ/и
Нспленоцитоввусл
овиях
in vitro
-
моделированиясинтезаоксидаазота
РисАктивностькатепсиновВ/и
Нтимоцитоввусловиях
in vitro
-
моделированиясинтезаоксидаазота
Вусловияхмоделированиядефицитасинтезаоксидаазотавыход
катепсиноввцитозольвозможно
происходитзасчетповреждениямембраныо
чемсвидетельствуетувеличениекоэффициенталабил
ьностикислойфосфатазы
дляселезенкиконтрольнойгруппы“вгруппе
L
-
NAME
±
“адля
тимуса
±
“против“
Сцельюоценки
степениаутокаталитическойактивациипроведен
сравнительныйанализкоэффициентааутокаталитическогодействияК
ас
a
)
катепсиновВ
L
Нселезенкиитимусакрыс
Вусловиях
in
vitro
-
модулирования
синтезаоксидаазотанаблюдаетсяодинаковаятенденцияизменени
я
коэффициентааутокаталитическогодействиякатепсиновВ
L
Нспленоцитов
(
таблитимоцитовтабл
5
вусловияхинкубациивполнойпитательнойсреде
с
L
-
аргинином
±
повышениекоэффициентаавусловияхинкубированиявполной
питательнойсредес
L
-
NA
ME
±
снижениекоэффициентааутокаталитического
действияотносительнозначенийконтроляигруппы
L
-
аргинина
Таблица
5
Значениекоэффициетааутокаталитическогодействиякатепсинов
B
,
L
,
H
спленоцитоввусловиях
in
vitro
-
модулированиисинтеза
NO
Ме>
min
;
max
])
Кас
a
катепсинаВ
Кас
a
катепсина
L
Кас
a
катепсина
H
селезенка
Контроль
1,85 [1,82; 2,05]
1,56 [1,39; 1,65]
1,74 [1,64; 2,08]
L
-
аргинин
мМ
2,03 [1,73; 2,14]*
р
1,70 [1,39; 1,97]
*
р
4
5
4,01 [3,78;
4,11]
*
р
L
-
NAME
мМ
0,27 [0,19;
0,33]
*
р
0,77 [0,51; 1,06]
*
р
0,47 [0,22; 0,62]
*
р
тимус
Контроль
1,15 [1,11; 1,25]
1,06 [1,06; 1,20]
1,09 [1,00; 1,20]
L
-
аргинин
мМ
1,57 [1,14; 1,80]*
р
1,21 [1,13; 1,33]*
р
1,13 [1,06; 1,53]*
р
L
-
NAME
мМ
0,52
[0,37; 0,70]*
р
0,50 [0,08; 0,59]*
р
0,68 [0,38; 1,12]*
р
Примечание
: *
±
статистическизначимыеотличияо
тконтрольнойгруппыр
21
Совместноевведение
L
-
аргининаи
L
-
NAME
мгкгспособствует
статистическизначимомуувеличениюобщейинеседиментируемойактивности
катепсинов
L
иНселезенкиотносительноконтроля
рис
21
тоестьвусловиях
даннойэкспериментальноймоделиэффект
L
-
NAME
сохраняется
Примечание
: *
±
статистическизначимыеотличияо
тконтрольнойгруппыр
Рис
21
.
АктивностькатепсиновВ
L
иН
селезенки
вусловиях
in
vivo
корригирующегодействия
L
-
аргинина
Рис
22
.
АктивностькатепсиновВ
L
иН
тимуса
вусловиях
in
vivo
корригирующегодействия
L
-
аргинина
Прианализеполученныхданныхбыливыявленыпрямыекорреляционные
связимеждуобщейплощадьюподкривойокислительноймодификациибелкови
общейактивностьюкатепсина
L
иНселезенкиподвлиянием
L
-
NAME
вусловиях
in
vivo
табли
in
vitro
табл
7
Даннаятенденциясвидетельствуето
существованиивзаимосвязипроцессовокислительногоповреждениябелкови
лизосомальногоцистеиновогопротеолизавусловияхдефицитасинтезаоксида
азота
22
Таблица
Коэффициенты
корреляции
R
междуобщимсодержаниемкарбонильных
производныхбелковиобщейактивностьюкатепсиновВ
L
иНселезенкии
тимусавусловиях
in
vivo
-
изменениясинтеза
NO
катепсинВ
катепсин
L
катепсинН
селезенка
тимус
селезенка
тимус
селезенка
тимус
Контроль
0,36
0,24
0,55
-
0,33
0,55
-
0,024
L
-
NAME
0,38
-
0,
20
0,62*
р
-
0,
20
0,67*
р
-
0,
10
L
-
аргинин
0,19
-
0,57
-
0,14
0,27
0,071
0,21
L
-
NAME
+
L
-
аргинин
-
0,05
-
0,61
-
0,11
0,39
0,36
0,23
Примечание
: *
±
статистическизначимыеотличияо
т
контрольнойгруппыр
Таблица
7
Коэффициентыкорреляции
R
междуобщимсодержаниемкарбонильных
производныхбелковиобщейактивностьюкатепсиновВ
L
иН
селезенкии
тимуса
вусловиях
in
vitro
-
изменениясинтеза
NO
катепсинВ
катепсин
L
катепсинН
спленоциты
тимоциты
спленоциты
тимоциты
спленоциты
тимоциты
Контроль
0,56
0,40
0,50
-
0,62
0,50
0,20
L
-
NAME
мМ
-
0,50
0,80
0,
95
*
р
0,60
0,90*
р
0,87
L
-
аргинин
мМ
-
0,87
-
0,60
0,20
-
0,60
-
0,50
-
0,60
Примечание
: *
±
статистически
значимыеотличияо
тконтрольнойгруппыр
Такимобразомактивностьлизосомальныхцистеиновыхпротеиназв
условияхмоделированиядефицитасинтезаоксидаазотанарастаети
сопровождаетсявыходомкатепсиноввцитоплазмузасчетповреждения
лизосом
альноймембраныВажноотметитьчтоизменениеуровняоксидаазота
влияетнааутопр
o
цессингкатепсиновВ
L
Нчтоимеетважноефункциональное
значениеКромеэтогопроцесскарбонилированиябелковиактивация
лизосомальныхцистеиновыхпротеиназ
L
иНселезенкивзаимосвязаны
ВЫВОДЫ
1.
Подавлениесинтезаоксидаазотаконкурентнымингибитором
N
-
нитро
-
L
-
аргининметиловымэфиромприводиткнарастаниюсодержания
карбонильныхпроизводныхбелковспреобладанием
динитрофенилгидразоновосновногохарактерас
елезенкиитимусапри
этомнаблюдаетсяистощениерезервно
-
адаптационногопотенциалаи
увеличениедоливторичныхмаркеровокислительногостресса
23
2.
Вусловияхдефицитасинтезаоксидаазотапроисходитактивация
лизосомальныхцистеиновыхпротеиназВ
L
Нселе
зенкиитимусакрыс
сопровождаемаяихвыходомвцитоплазмузасчетповреждения
лизосомальноймембраны
3.
Воздействиесубстратасинтезаоксидаазота
L
-
аргининаприводитк
снижениюуровнякарбонильныхпроизводныхбелковбезизменения
активностикатепсиновВ
L
НтимусаиселезенкикрысПрименение/
-
аргининавусловияхмоделированиядефицитасинтезаоксидаазота
оказываеткорригирующеевоздействиенапоказателиокислительной
модификациибелководнакодляактивностикатепсиновсохраняется
эффект
N
-
нитро
-
L
-
ар
гининметиловогоэфира
4.
Междуокислительнымкарбонилированиембелковиактивностью
лизосомальныхцистеиновыхпротеиназ/иНселезенкивыявлена
положительнаякорреляционнаясвязьвусловияхмоделированиядефицита
синтезаоксидаазота
СПИСОКРАБОТОПУБЛИК
ОВАННЫХПОТЕМЕДИССЕРТАЦИИ
Работыопубликованныевведущихрецензируемыхжурналах
рекомендованныхВысшейаттестационнойкомиссиейМинобрнаукиРоссии
1.
Абаленихина
ЮВ
Катепсин
Виммунокомпетентныхоргановкрысв
условияхмодуляциисинтеза12>Текст@ЮВАбаленихина
,
МАФомина
Научноеобозрение
±
2013.
±
№
-
С
-
52
.
печл
2.
Абаленихина
ЮВ
Окислительнаямодификациябелковиизменение
активностикатепсина/
селезенкикрысвусловияхмоделированиядефицита
синтезаоксидаазота>Текст@ЮВАбаленихинаМАФоминаСАИсаков
Росмедико
-
биолвестнимакадИППавлова
±
2013.
±
№
±
С
-
48
.
(0,34
печл
3.
Абаленихина
ЮВ
Окислительнаямодифика
циябелковселезенкикрыс
приэкспериментальномдефицитесинтезаоксидаазотаразнойвыраженности
>Текст@ЮВАбаленихина
,
МАФомина
Фундаментальныеисследования
±
2013.
±
№часть
-
С
-
1855.
(
печл
4.
Абаленихина
ЮВ
Окислительнаямодификациябелковиактивность
катепсинаНтимоцитовкрысвусловияхLQYLWURмодулированиясинтезаоксида
азота,,>Текст@ЮВАбаленихина
,
МАФомина
Казанмеджурн
±
2014.
±
№
±
С
-
557.
печл
Работы
опубликованныевдругихрецензируемыхжурналах
1. Fomina, M.A. Cathepsins B, L and H Splenocytes as the Secondary Antioxidant
Systems in the Conditions
of Carbonyl Stress [Text] / M.A. Fomina,
Yu.V.
Abalenikhina
// Advances in Biochemistry, 2015.
±
Vol.3,
№
±
P. 5
-
8
.
(0,25
печ
.
л
.)
24
Материалынаучныхконференций
1.
Абаленихина
ЮВ
Влияние/
-
аргининанаактивностькатепсиновВиН
селезенкикрыс>Текст@ЮВАбаленихина
,
МАФомина&бнаучтр
посвящ
. 90
-
летиюсоднярождениявыдающегосяобщегопатологаи
патофизиологаакадемикаГНКрыжановскогои
-
летиюсоднярождения
основоположникароссийскойнаучнойклиническоймедициныСПБоткина
©Актуальныепроблемыклиническойиэкспериментальнойпатоло
гииªподред
ЮЮБяловскогоВВДавыдова
±
РязаньРязГМУ
±
С
-
17.
печл
2.
Абаленихина
ЮВ
Активностькатепсина/спленоцитовкрысвусловиях
in vitro
-
модулированиясинтезаоксидаазота>Текст@ЮВАбаленихина
,
МА
Фомина&б
научтрпоматериалам,ХМеждунарнауч
±
практконф
©Достиженияфундаментальныхнаукивозможноститрансляционноймедициныв
решенииактуальныхпроблемздравоохраненияªподредХМГалимзянова>и
др@
±
АстраханьГБОУВПОАстр
аханскаяГМА
3.
±
С
-
печл
3.
Абаленихина
ЮВ
Влияние1
-
нитро
-
L
-
аргининметиловогоэфирана
активностьи
аутопроцессингкатепсина/крысLQYLYRиLQYLWUR>Текст@ЮВ
Абаленихина
,
МАФомина&бнаучтрпоматериаламХ,,региональнойнауч
±
практконфсМеждунаручастием©Обменвеществприадаптациии
поврежденииднилабораторнойдиагностикиюжногофедеральногоокругаª
подредЗИМикашинович
±
РостовнДГБОУВПОРостГМУ
±
С
-
7.
печл
4.
Абаленихина
ЮВ
Влияние1
-
нитро
-
L
-
аргининметиловогоэфирана
спектрокислительноймодификациибелковижизнеспособностьспленоцитовLQ
YLWUR>Текст@ЮВАбаленихина
,
МАФоминаСбнаучстатей9Роснауч
±
практконф©ЗдоровьечеловекавХХ,векеªподредпрофСС
Ксембаева
КГМУ
±
КазаньИзд
-
во
©Отечествоª
±
С
-
печл
5.
АбаленихинаЮВ
Влияниемодуляторовсинтезаоксидаазотана
окислительнуюмодификациюбелковспленоцитовкрыс>Текст@ЮВ
АбаленихинаСбтрМеждунарсимпоз©Биох
имия
±
основанаукожизниª
состНИАкбероваФГАОУВПО©КазанскийПриволжскийфедеральный
университ
етª
-
Казань
±
С
-
печл
6.
АбаленихинаЮВ
Корригирующеедействие/
-
аргининана
окислительнуюмодификациюбелковселезенкикры
свусловияхмоделирования
дефицитасинтеза12>Текст@ЮВАбаленихинаБюллетеньсеверного
государственногомедицинскогоуниверситетаподредСИМалявской>идр@
±
Архангельск
СГМУ
±
№
-
С
-
печл
7.
Абаленихина
ЮВ
С
пектрокислительноймодификациибелковкакновый
подходканализувлияния/
-
аргининанаобразованиекарбонильныхпроизводных
протеиновтимусакрыс>Текст@ЮВАбаленихина
,
МАФоминаСбтезпо
материаламВсероснауч
±
практконфсМеждунаруч
астиемпосвящ
-
летию
Рязанскогогосударственногоуниверситета©Здравоохранениеобразование
наукаинновацииªподредпрофРЕКалинина>идр@
±
Рязань
РИОРязГМУ
2013.
±
С
-
печл
25
8.
ФоминаМАВлияние/
-
аргининанаактивность
катепсинов/иН
селезенкикрысвусловияхмоделированногодефицитасинтезаоксидаазота
>Текст@МАФомина
ЮВАбаленихина
&бнаучстатейпоматериаламРос
науч
±
практконфсМеждунаручастием©Актуальныевопросымедицинской
биохимииикли
ническойлабораторнойдиагностикиªподредИГМустафина
>идр@КГМУ
±
КазаньИзд
-
во
©Отечествоª
±
С
-
печл
9.
Абаленихина
ЮВ
Регуляцияактивностикатепсина/селезенкикрысв
условияхLQYLYRмоделированиядефецитасинтеза
оксидаазота>Текст@ЮВ
Абаленихина
,
МАФоминаСбстатейМеждунарнауч
±
практконф
©АктуальныевопросыразвитиянаукиªподредААСукиасян
±
Уфа
РИЦ
БашГМУ
±
С
-
66
.
печл
10.
Абаленихина
ЮВ
Резервно
-
адаптационный
потенциал
иммунокомпетентныхтканейпри/
-
NAME
-
индуцируемомокислительном
стрессе>Текст@ЮВАбаленихина
,
МАФомина&бнаучтрпоматериалам
ХюбилМеждунарконф©Окислительныйстрессисвободнорадикальные
патологииªФГБУ©Российскийкарди
ологическийнаучно
-
производственный
комплексªМЗРФ
±
Пицунда
(
Абхазия
), 2014.
±
С
. 7
.
(0,063
печ
.
л
Патент
на
изобретение
1.
Пат
. 2524667
РФ
,
МПК
G
01
N
33/52.
Способ
комплексной
оценки
содержания
продуктов
окислительной
модификации
белковвтканяхи
биологическихжидкостях>Текст@
МАФомина
ЮВАбаленихина
НВ
ФоминаААТерентьевГБОУВПОРязгосмедун
-
тимакадИППавлова
±
заявлоп
ублБюл
±
спечл
Методическиерекомендаци
и
1.
ФоминаМАСпособкомплекснойоценкисодержанияпродуктов
окислительноймодификациибелковвтканяхибиологическихжидкостях
методическиерекомендации>Текст@МАФомина
ЮВАбаленихина
ГБОУ
ВПОРязГМУМинздрава
±
РязаньРИОРязГМУ
, 2014.
±
60
спечл
Ɋɚɛоɬɚɜы 000;полнɟнɚɜȽоɫɭɞɚɪɫɬɜɟнномɛюɞжɟɬномоɛɪɚзоɜɚɬɟльн 026;耦怀ɭчɪɟжɞɟ 6;瀀ии
ɜыɫшɟɝоп 6;ꀀоɮɟɫɫионɚл 027;怀ноɝооɛɪɚ 026;ကоɜɚния©Ɋ 027;退зɚнɫкийɝ 000;оɫɭɞɚɪɫɬ 5;쀀ɟнный
мɟɞицинɫки 026; ɭниɜɟɪɫи 026;쀀ɟɬимɟниɚкɚɞɟмик 025;ꀀИППɚɜлоɜɚªМиниɫɬɟɪɫɬ 5;쀀ɚ
зɞɪɚɜооɯɪɚ 026;瀥нияɊоɫɫи 000;йɫкойɎɟɞ 025;ɪɚции
Нɚɭчныйɪɭкоɜоɞиɬɟл 027;怀
кɚнɞиɞɚɬ 026;怀ɟɞицинɫкиɯ 000;нɚɭкɞоц 025;нɬɎоминɚ 000;МɚɪияȺл 025;кɫɟɟɜнɚ
Оɮициɚльныɟоппон 5;нɬы
ШɭмɚɟɜКонɫɬɚнɬинȻоɪиɫоɜи 7;က
-
ɞокɬоɪɛиол 026;耥퀀ичɟɫкиɯ 0; нɚɭкɫɬɚ 000;ɪшийнɚɭчный
ɫоɬɪɭɞниклɚɛоɪɚɬоɪииɚзоɬɮикɫ 5;ꀀцииимɟɬɚɛолизмɚɚзоɬɚ
Инɫɬиɬɭɬɚ
ɛиоɯимии
имȺН 0; ȻɚɯɚɎɟɞ 025;ꀀɚльноɝо
ɝоɫɭɞɚɪɫɬɜɟнноɝо
ɭчɪɟжɞɟни 027;退Ɏɟɞɟɪɚль 000;ноɝо
иɫɫлɟɞоɜɚɬɟльɫкоɝо
цɟнɬɪɚ
©Ɏɭнɞɚмɟ 026;瀦쀀ɚльныɟоɫноɜыɛиоɬɟɯ 026;瀦耦倦耥퀀ииª
Ɋоɫɫийɫкой 000; ɚкɚɞɟмии 0; нɚɭк
,
ɝМоɫкɜɚ
ȿɪлыкинɚ 023;лɟнɚИɜ 025;ꀀноɜнɚ
-
ɞокɬоɪɛио 026;倀оɝичɟɫки 026; нɚɭк 6;逦ꀀоɮɟɫɫоɪ 000;
зɚɜɟɞɭющɚя
кɚɮɟɞɪой 5;뀀иолоɝичɟɫкойɯимиии 6;怀ȽЯȽоɪоɞиɫɫко 6;
Ƚоɫɭɞɚɪɫɬɜɟнноɝоɛюɞжɟɬноɝо
оɛɪɚзоɜɚɬɟ 6;倀ьноɝо
ɭчɪɟжɞɟния
ɜыɫшɟɝо
пɪоɮɟɫɫионɚ 6;倧怀ноɝооɛɪɚзоɜɚния©Нижɟɝоɪоɞɫ 6;䀀ɚяɝоɫɭɞɚɪɫɬɜɟннɚ 7;退мɟɞицинɫкɚя
ɚкɚɞɟмияª
Миниɫɬɟɪɫɬɜɚзɞɪɚɜооɯ 6;ꀥꀀнɟнияɊоɫɫийɫкойɎɟɞɟɪɚции
ȼɟɞɭщɚя 026;耦ꀀɝɚнизɚц 6; я
Ɏɟɞɟɪɚльно 5;ɝоɫɭɞɚ 6;ꀦ뀀ɬɜɟнноɟ 025;뀀юɞжɟɬноɟɭчɪɟжɞɟниɟ 000;
нɚɭки
©Инɫɬиɬɭɬ
ɛиолоɝииКɚɪɟльɫкоɝ 026;耀нɚɭчноɝо
цɟнɬɪɚ
ª
Ɋоɫɫийɫк 6;耦 ɚкɚɞɟм 026; и
нɚɭк
Зɚщиɬɚ
диссертации
ɫоɫɬоиɬɫя
©ª
окɬяɛɪя
ɝɜ
14-00
чнɚзɚɫ 000;ɟɞɚнии
Ⱦиɫɫɟɪɬɚционноɝоɫоɜ 5;ɬɚȾпɪи 4;ȽȻНɍ©НИИпиɬɚнияªпоɚɞɪɟɫɭ
:
ɝ 000;Моɫкɜɚɍɫɬьинɫкий 000; пɪоɟзɞɞ 1;က
ɋɞиɫɫɟɪɬɚциɟйможноознɚкомиɬь 6;뀀яɜɛиɛл 026;…耦쀀ɟкɟɎȽ 3;뀀Нɍ©НИИп 026; ɬɚнияªинɚ
ɫɚйɬɟ
www.ion.ru
Ⱥɜɬоɪɟɮɟɪɚ 6;쀀ɪɚзоɫлɚн a;退BBBªBBBBBBBBB
ɍчɟныйɫɟк 6;ꀥɬɚɪь
Ⱦиɫɫɟɪɬɚци 6;耦瀦瀦耥퀦耀 ɫоɜɟɬɚ
ɞокɬоɪɛиол 026;耥퀀ичɟɫкиɯ
нɚɭк
ШилинɚН 024;怀