Отсутствие PR, как и ER-?, определяется как отрицательный РМЖ (TNBC), рассматриваемый как агрессивное заболевание, поражающее молодых пациентов, и характеризующееся ранним рецидивом


Чтобы посмотреть этот PDF файл с форматированием и разметкой, скачайте файл и откройте на своем компьютере.
Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования «Санкт - Петербургский политехнический университет Петра Великого» Институт физики, нанотехнологий и телекоммуникаций Кафедра «Медицинская физика» Работа допущена к защите зав. кафедрой «МФ» ____________ И.Б . Безпрозванный «___» ___________________ 2017 г. ВЫПУСКНАЯ РАБОТА БАКАЛАВРА Тема: РОЛЬ ЭКСПРЕССИИ РЕЦЕПТОРОВ К ПРОГЕСТЕРОНУ И ЭСТРОГЕНУ В ДИАГНОСТИКЕ ФИБРОАДЕНОМАТОЗА И РАК А МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ Направление: 16.03.01 Техническая физика Профиль подготовки: 16.03.01 06 Медицинская и бионженерная физика Работа выполнена на базе ФГБНУ «НИИ акушерства, гинекологии и репродуктологии им. Д. О. Отта» Выпо лнил а студент ка гр. 43401/1: __________ ___ Лазарева В. С. Руководители: ____________ _ доц., к.б.н. Дробинцева А .О. ____________ д.б.н. Линькова Н.С. Санкт - Петербург 2017 2 СОДЕРЖАНИЕ СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ ................................ ................................ .................. 4 ВВЕДЕНИЕ ................................ ................................ ................................ .............. 5 Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ. ................................ ................................ ........ 7 Нейрои ммуноэндокринология молочной железы. ................................ .......... 7 1.1. Онтогенез молочной железы ................................ ................................ ............ 7 1.2. Анатомия и гистологическое строение молочной железы ......................... 10 1.3. Гормональная регуляция функций молочной железы в норме при новообразованиях ................................ ................................ ................................ ... 12 1.3.1. Эстроген ................................ ................................ ................................ ........ 12 1.3.2. Фактор роста эндотелия сосудов ФРЭС ................................ .................... 13 1.3.3. Прогестерон ................................ ................................ ................................ .. 13 1.3. 4. Андроген ................................ ................................ ................................ ....... 14 1.4. Молекулярные маркеры фиброаденоматоза и рака молочной железы ..... 16 1.4.1. Рецептор - альфа к эстрогену ER - α ................................ .............................. 16 1.4.2. Рецептор - бета 1 к эстрогену ER - β1 ................................ ............................ 18 1.4.3. Рецепторы к прогестерону PR ................................ ................................ .... 18 1.4.4. PTEN ................................ ................................ ................................ .............. 19 1.4.5. Ki - 67 ................................ ................................ ................................ ............... 19 1.4.6. Рецептор 2 эпидермального фактора роста человека HER2 .................... 20 Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ .......................... 22 2.1. Гистологический метод ................................ ................................ .................. 22 2.2. Иммуногистохимический метод ................................ ................................ .... 22 2.3. Морфометрия ................................ ................................ ................................ ... 24 2.4. Статистичес кий анализ данных ................................ ................................ ..... 25 3 Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ ....... 27 3.1. Экспрессия рецепторов - альфа к эстрогену в ткани молочной железы у женщин с пролиферативным и непролиферативным фиброаденоматозом и раком молочной железы ................................ ................................ ........................ 27 3.2. Экспрессия рецепторов - бета 1 к эстрогену в ткани молочной железы у женщин с пролиферативным и непролиферативным фиброаденоматозом и раком молочной железы ................................ ................................ ........................ 30 3.3. Экспрессия рецепторов к прогестерону в ткани молочной железы у женщин с пролиферативным и непролиферативным фиброаденоматозо м и раком молочной железы ................................ ................................ ........................ 33 ЗАКЛЮЧЕНИЕ ................................ ................................ ................................ .... 38 ВЫВОДЫ ................................ ................................ ................................ ............... 39 СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ ................................ ................................ .................. 40 4 СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ ИГХ иммуногистохимия МЖ молочная железа ОПЭ ответные прогестерону элементы РМЖ рак молочной железы ФАМ фиброаденоматоз ФРЭС фактор роста эндотелия сосудов ЭДК эндокринные дизрапторы ЭС ФРЭС эндокринноспецифический фактор роста эндотелия сосудов CSC раковые стволовые клетки ( cancer stem cells ) ER - α рецептор - альфа к эстрогену ( estrogene receptor - alpha ) ER - β 1 рецептор - бета 1 к эстрогену (estrogene receptor - HER2 рецептор 2 эпидермального фактора роста человека (human epidermal growth factor receptor 2) PR рецептор ы к прогестерону ( progesterone receptor) WB промывочный буфер ( w ash b uffer) 5 ВВЕДЕНИЕ Фиброаденоматоз ( ФАМ ) и рак молочной железы (РМЖ) – социально значимые заболевания. По данным Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ) РМЖ является самым распространенным онкологическим заболеванием среди женского населения планеты. В 2012 г. в Российской Федерации забо леваемость РМЖ у женщин составила 20,7% в структуре онкологической патологии, а смертность от данного забо левания – 17,1%. ФАМ характеризуется широким спектром пролиферативных и регр ессивных изменений ткани молочной железы (МЖ) с изменением соотношения эпителиального и соединительнотканного компонентов. У пациенток с ФАМ РМЖ встречается в несколько раз чаще, чем у женщ ин без патологии МЖ . Частот а встречаемости ФАМ среди женщин репродуктивного возраста достигает 60 - 80%. Поиск информативных маркеров для дифференциаль ной диагностики ФАМ и РМЖ является актуальной задачей репро дуктивной медицины и молекулярной биологии. Среди факторов риска развития ФАМ и РМЖ выделяют 4 основных группы: генети ческие (наличие ФАМ и РМЖ у родственников), репродуктивные (ранн е е менархе , поздняя менопауза, аборты, отсутствие беременностей, бесплоди е, поздние первые роды, короткий период лактации или ее отсутствие и т.д.), обменные и эндокринные (избыточное влияние эстрогенов, нарушения менструального цикла и т.д.), влияние внешней среды и образа жизни (питание с большим количеством насыщенных жиров, стрессы, воздействие курения и т.д.) И звестно, что значител ьную роль в развитии ФАМ и РМЖ играют гормоны - эстрогены, прогестероны, андрогены и другие сигнальные молекулы, например, фактор роста эндотел ия сосудов (ФРЭС) . Цель работы – изучить различия в экспресси и рецепторов к прогестерону , рецепторов - альфа к эстрогену и рецепторов - бета 1 к эстрогену в ткани молочной железы у женщин с фиброаденоматозом и раком молочной железы по сравнению с нормой. 6 В задачи исследования входило : 1. Оценить экспрессию рецепторов - альфа к эстрогену ER - α в ткани молочной железы у женщин с пролиферативным и непролиферативным фиброаденоматозом и раком молочной железы по сравнению с нормой. 2. Изучить экспрессию рецепторов - бета 1 к эстрогену ER - β 1 в ткани молочной железы у женщин с пролиферативным и неп ролиферативным фиброаденоматозом и раком молочной железы по сравнению с нормой. 3. Оценить эксп рессию рецепторов к прогестерону PR в ткани молочной железы у женщин с пролифератив ным и непролиферативным фиброаденоматозом и рако м молочной железы по сравнению с нормой. 7 Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ. Нейроиммуноэндокринология молочной железы. 1.1 . Онтогенез молочной железы МЖ – видоизмененная потовая железа, парный железистый орган, имеется у женщин и мужчин. Эмбриогенез МЖ начинается во внутриутробном периоде (в конце 6 - й недели), когда на боковых поверхностях грудной части туловища формируются двухсторонние утолщения эктодер мы (молочные линии). Эти зоны представляют собой первичные зачатки МЖ . Они представлены небольшими гроздевидными скоплениями эпителиальных клеток, из которых в подлежащую мезенхиму прорастают тяжи. Из тяжей формируется пр отоковая система МЖ . В этот же пери од происходит дифференцировка соединительной ткани МЖ (до 6 месяцев внутриутробной жизни) [1] . У нов орожденных детей МЖ представляет собой систему протоков с неразвитыми концевыми отделами. Их выстилка состоит из слоя эпителия и миоэпителиальных клеток, ко торые располагаются на тонкой базальной мембране. Первоначально миоэпителиальные клетки образуют сплошной слой, позднее они располагаются прерывисто. Cтрома МЖ рыхлая, содержит тонкие коллагеновые волокна и большое количество фибробластов, фиброцитов ( мало дифференцированных фибробластов ), лимфоцитов. До периода полового созревания МЖ находится в состоянии покоя, при этом ее структуру в большей степени составляет опорная строма и жировая ткань [1] . С начала полового созревания отмечается посте пенный рост мас сы МЖ , прогрессирующее развитие железистого и соединительнотканного компонентов [1] . Все изменения, которые происходят в МЖ женщины в течение девяти месяцев беременности, направлены на подготовку к здоровой лактации:  Прежде всего, МЖ беременной женщины с п ервых дней беременности начинаю лучше снабжаться кровью.  В МЖ беременной женщины отмечаются пролиферативные процессы, которые обусловлены гормональными изменениями. 8  На гормональном уровне изменяется выделение таких гормонов, как эстрогены, прогестерон и пл ацентарный лактоген, что характерно для периода беременности.  Прол иферация в тканях МЖ больше всего задевает молочные протоки и альвеолы, при этом происходит не только обычное разрастание тканей, но и увеличение количества альвеол и молочных протоко в, а та кже дольки МЖ увеличиваются в объеме.  Во второй половине беременности отмечается образование в тка нях МЖ жировых включений и усиливается синтез в альвеолах таких веществ, как казеин, лактоглобулин и лактальбумин.  На последних сроках вынашивания ребенка из сосков выделяется особое вещество, которое предшествует выделению грудного молока, — молозиво. Именно молозиво особенно богато иммуноглобулинами и способно защитить организм новорожденного от множества заболеваний [1] . МЖ при лактации. Грудные железы женщи ны состоят из альвеол, имеющих схожесть с пузырьками. Благодаря гормону пролактину к летки альвеол синтезируют молоко из крови. Внешняя их часть состоит из мышечной ткани, которая, сокращаясь благодаря гормону окситоцину , продвигает произведенное молоко по протокам, отходящим от альвеол. Каждая доля железы содержит несколько десятков таких альвеол, которые объединяются протоками. Сама грудная железа состоит из примерно двадцати долей, в центре которых располагается ареола. Доли разделяются друг от друга жиро вой и соединительной тканями. Все протоки вблизи ареолы имеют расширения в виде мешочков, называемые синусами, в которых и происходит накопление молока. От синусов каналы идут к соскам, в них же они раскрываются [1] . МЖ при климаксе. При климаксе происходят изменения в МЖ (инволюция, или обратное развитие), ведь половых гормонов стало мало, менструального цикла нет, да и грудное вскармливание уже не пригодится. Физиолог ическая инволюция МЖ при климаксе: 9 1. Жировая инволюция – замена желез истого ко мпонента МЖ жировой тканью, которая не несет в себе специфических функций. 2. Фиброзная инволюция – замена железистой ткани соединительной тканью. В таком виде обратное развитие МЖ может осложниться образованием опухолей и кист, которые обычно носят добро качественный характер, но всегда имеют риск озлокачествления. Такой процесс называется "фиброзно - кистозная инволюция". 3. Фиброзно - жир овая инволюция – МЖ состоит из жира и сое динительной ткани [1] . В пременопаузе МЖ могут уплотниться, отекать и несколько увеличиться в размерах [1] . Посл е менопаузы МЖ становятся мягкими, обвисают, меняют свой размер, у женщин с лишним весом они увеличиваются в размере за счет лишнего жира, а у худощавых дам – наоборот, уменьшаются, могут атрофироваться полностью. Меняется и сосок, он обвисает, уменьшается в размерах, б леднеет [1] . Мужская МЖ имеет то же строение, что и женская, но при нормальном гормональном балансе организма не развивается (не увеличивается на этапе полового созревания и остается в таком виде на протяжении всей жизни) . Грудной сосок и околососковый кр ужок у мужчин значительно меньше, чем у женщин. Сосок выступает над поверхностью груди всего на 2 — 5 мм. Положение сосков относительно вертикали может отличаться. Обычно сосок располагается на высоте пятого ребра, реже — на уровне четвёртого или пятого межр еберья. У взрослого мужчины тело железы достигает примерно 1,5 см в ширину и 0,5 см в толщину. Дольки и протоки почти не развиты, находятся в зачаточном состоянии. При нарушениях гормонального баланса может наблюдаться увеличение груди (гинекомастия). Иног да бывают случаи полителии ( наличие добавочных сосков ) [1] . Варианты нормы при увеличении МЖ у мужчин. С разу после появления на свет на протяжении 14 – 2 8 дней железы немного увеличены . В пубертатный 10 период у мальчиков может наблюдаться такое явление, но не более чем через 2 года железы должны уменьшиться . В пожилом возрасте в организме мужчины уменьшается уровень андрогенов и железы могут стать крупнее. У плотнения, узелки и шишечки могут появиться у мальчиков вокруг сос ков в возрасте от 12 до 14 лет. Спустя год уплотнения рассасываются. В этот период существует вероятность появления неприятных ощущений, припухлости сосков. Данное явление (физиологическая гинекомастия) наблюдается почти у двух третей подростков. Если же п одобные узелки и уплотнения не проходят или образуются у мужчин после 18 лет, необходимо пройти ультразвуковое обследование (УЗИ) [1] . Старение МЖ. И нво люция (старение) МЖ после лактации является важным этапом ее нормального развития, она сопровождается а ктивацией апоптоза эпителиальных клеток и характеризуется экспрессией факторов, приводящих к программированной клеточной гибели. С 40 - летнего возраста в МЖ отмечается увеличение относительного содержания жировой ткани, уменьшение степени развития жел езисто й паренхимы, числа долек. В период с 50 до 60 лет происходят процессы фиброзирования внутридольковой стромы, междольковая строма при этом практически не определяется в связи с ее редукцией. Тип ичной структурой МЖ после 60 лет являются отдельные островки фи брозной ткани с редкими протоками и дольками, лежащие в жировой клетчатке [1] . 1.2 . Анатомия и гистологическое строение молочной железы На поверхности МЖ имеется небольшой выступ – грудной сосок. Как правило, у нерожавших женщин сосок имеет конусообразную форму, у рожавших – цилиндрическую (такая форма облегчает ребенку захват, что не вызывает проблемы с грудным вскармливанием) . Сосок окружен ареолой диаметром 3 - 5 сантиметров. Пигментация кожи соска и ареолы более темная по сравнению с цветом кожных покрово в. У нерожавших женщин – розоватая или темно - красная, у рожавших – буроватая. Во время беременности интенсивность пигментации усиливается. В околососковом кружке имеется некоторое 11 количество небольших рудиментарных МЖ ( желез Монтгомери), образующих вокруг соска небольшие возвышения. Кожа соска покрыта мелкими морщинами. У верхушки соска находятся небольшие отверстия – млечные поры, которые представляют собой окончания молочных протоков, идущих от верхушек молочных долей. МЖ содержит 15 - 20 долей, составляющи х тело железы и напоминающих по форме конус. Доли расположены по кругу вокруг соска, обращенных верхушкой к нему. Между долями тонкие слои соединительных волокон. При этом каждая доля в свою очередь разделена на дольки (от 30 до 80 в одной доле), которые с остоят из альвеол [1] . Протоки МЖ идут от верхушек больших долей до соска, выходя на его поверхность в виде отверстий – млечных пор. Диаметр молочных протоков составляет от 1,7 до 2,3 мм. Некоторые молочные протоки сливаются между собой, поэтому количест во молочных отверстий всегда меньше количества протоков (от 8 до 15) [1] . Собственно МЖ представляет собой плотное тело в форме выпуклого диска. Это тело окружено слоем жира. Кровоснабжение МЖ осуществляется в ос новном внутренней грудной и боковой грудной артериями. Размер и форма груди индивидуальны. Индивидуальные различия в величине женской груди обусловлены толщиной подкожного жирового слоя. Форма груди (стоячая или отвислая) зависит от прочности и упругости капсулы из соединительной ткани, в которую за ключена МЖ. Таким образом, ни размер, ни форма груди не влияют на способность женщины к грудному вскармливанию [1] . Гистологическое строение МЖ. Каркас МЖ состоит из соединительных волокон (стромы) между которыми находится железистая ткань. Строма и желез истая ткань погружены в жировые клетки. При этом в различные периоды жизни пропорция между железистой и жировой тканью меняется [1] . Функции МЖ. П е рвичной функцией МЖ является продуцирование молока для питания ребенка (лактация). Ша рообразная форма МЖ предупреждает потерю тепла, так как для нормальной продукции молока необходима соотве тствующая температура. Другая теория утверждает, что данная форма 12 груди возникла для предупреждения удуше ния ребенка во время кормления [1] . 1.3 . Гормональная регуляция функций молочной железы в норме при новообразованиях На рост и метастазирование раковых клеток вли яют следующие гормоны: эстроген , ФРЭС , прогестерон , андроген . 1.3.1 . Эстроген Для женщин основным овариальным стероидным гормоном является эстроген, также ка к и прогестерон , которые совокупно отвечают за развитие признаков женского пола и поддержание менструального цикла . Кроме того, длительное воздействие высоких уровней овариальных стероидных гормонов увели чивает риск РМЖ у женщин в предклимактерическом возрасте [ 1 9 ] . РМЖ – одно из чаще всего диагностируемых злокачественных новообразований у женщин, в основном характеризующихся эстрогеннозависимым ростом [28] . Эндокринные дизрапторы (ЭДК) обладают эстрогенными свойствами, которые, как было доказано, при водят к увели чению риска РМЖ . В то время как непосредственное влияние ЭДК на клеточн ую биологию РМЖ и рост опухоли было хорошо изучено, их роль в составе, передаче сигналов и структуре микросреды опухоли определена недостаточно. Эстрогенная нацеленность ст ромальных клеток опухоли может направлять паракринную сигнализаци ю на клетки РМЖ , регулируя онкогенез и развитие. Более того, было доказано, что передача сигналов через э строгены изменяет архитектуру груди и синтез компоне нтов внеклеточного матрикса. Такж е б ыло доказано, что ЭДК индуцировали структу рные изменения в МЖ , а также приводили к увеличению коллагеновых волокон в тканевой строме. В предыдущих работах продемонстрировано, что мезенхимные стволовые клетки человека ( hMSC ) являются существенными компонентами микросреды опухоли и непосредственными мишен ями как эстрогенов, так и ЭДК. Более того, взаимное влияние «эстроген – стволовая клетка» и грает роль в развитии РМЖ и приводит к увеличению пролиферации опухолевых клеток, а нгиогенеза и 13 инвазии [ 17 ] . Нормальные эпителиальные клетки из ткани МЖ задействованы в метаболизме эстрогена с различиями в зависимости от клеточной популяции. В канцерогенез МЖ вовлечены высокие уровни эстрогена. Тот факт, что эстроген может быть ассоци ирован с повышением риска развития РМЖ , подтверждается ненормальными изменениями, которые происходят в гормональных сигнальных путях, и полиморфизмом генов, которые кодируют данные белковые продукты. В отличие от нормальных тканей МЖ у других видов человеч еская МЖ демонстрирует постоянную во времени экспрессию эстрогена . Было также показано, что во время лактации чувствительность к эстрогену снижалась [ 21 ] . 1.3.2. Фактор роста эндотелия сосудов ФРЭС ФРЭС ( VEGF ) имеет важное значение для роста и метастазирования раковых клеток [22] . В 2001 г. был охарактеризован и секвенирован еще один ангиогенный фактор – эндокринноспецифический фактор роста эндотелия сосудов (ЭС ФРЭС, EG - VEGF ). Сфера воздействия ЭС ФРЭС ограничивается эндотелиальны ми клетками, полученными из желез внутренней секреции. Е го экспрессия регулируется гипоксией и стероидными гормонами. Несмотря на то, что ФРЭС и ЭС ФРЭС различаются структурно, функционируют они скоординировано [ 3 ] . 1.3.3. Прогестерон Прогестерон играет це нтральную роль в развитии МЖ. С ведения о клеточных линиях РМЖ человека, образцы опухолей пациентов и клинические исследования указывали на прогестерон как фактор риска развития РМЖ , и что изменения в прогестероновых сигнальных путях способствуют развитию опухоли на раннем этапе. Прогестерон, также как и эстроген, способен повышать ФРЭС mRNA (иРНК) и/или экспрессию протеина [ 22 ] . Среди овариальных стероидных гормонов прогестерон демонстрирует свое митогенное действие на МЖ главным образом прямым действием или через 14 паракринную сигнализацию [23] . Физиологические эффекты прогестерона модифицируют ся взаимодействием с PR , одним из лигандоактивируемых транскрипционных факторов. Было выявлено, что прогестерон мо жет усилить пролифер ацию клеток РМЖ и активировать протеинкиназы, входящие в митоген активируемые каскады ( MAPK ) [ 1 9 ] . Прогестерон, также как и эстроген, является модулятором клеточной активности в МЖ и связывается со специфическими рецепторами, размещенными в ядре клетки. Пубертатная МЖ менее чувствительна к прогестерону по сравнению со зрелой железой [ 21 ] . 1.3.4. Андроген Овариальные гормоны , прогестерон и эстроген, играют важные роли в этиологии РМЖ, пролиферации и лечении. Андрогены также могу т вносить свой вклад в риск развития РМЖ и его прогрессирование [29] . В последние годы были достигнуты значительные успехи в определении ролей данных стероидных гормонов в гомеостазе стволовых клеток в МЖ. Стволовые клетки являются потенциальным источником РМЖ и способны определять опухолевый фенотип. Прогестерон был идентифицирован как гормон, регулирующий нормальные стволовые клетки человеческой МЖ. Синтетические прогестины увеличивают риск РМЖ человека; одна теория предполагает, что это происходит через увеличение количества стволовых клеток [33] . Обработка прогестероном также приводит к увеличению количества раковых стволовых клеток ( CSC ) МЖ в известных клеточных линиях РМЖ (Рис. 1). Частично это происходит через посредство прогестероновой регуляции тран скрипционных факторов, сигнальных трансдукционных путей и микроРНК. Также появляются свидетельства, что эстрогены и андрогены могут регулировать количества CSC МЖ . В набирающей силу концепции, что фенотип CSC МЖ является динамическим, и на него могут оказывать влияние клеточная сигнализация и внешние сигналы, подчеркивается, что стероидные 15 гормоны могли бы быть критическими игроками в управлении числом и функцией CSC [ 12 ] . Рис. 1. Схема механизмов, вовлеченн ых в регуляцию стероидными гормонами роста раковых клеток [ 12 ] . Эстроге ны связывают ER - α , повышая транскрипцию целевых генов FGF 9, - 7 и miR - 29 abc . FGF 9 участвует в паракринной и, возможно, аутокринной сигнализации, повышая транскрипцию транскрипционного фактора Tbx 3. Для инициации сигнальных путей EGFR и Hippo эстрогены также могут связывать GPR 30. Прогестерон или прогестины связыв ают PR , приводя к повышению экспрессии транскрипционных факторов ( Stat 5, Bcl 6, Klf 5, и Klf 4), членов пути Notch ( Notch 2, Jagged 1) и членов семейства Wnt ( Wnt - 1). Могут секретироваться Wnt и другие внешние факторы, оказывающие влияние на дедифференциацию секретирующих или соседних клеток. Как прогестерон, так и прогестины связы вают PR , приводя к понижающей регуляции GATA 3, miR - 141 или miR - 29 abc и повышению популяций CSC ; GATA 3 повышающе регулирует экспрессию miR - 29 b . Андрогены или прогестины свя зывают андрогеновый рецептор ( AR ), подавляя транскрипцию микроРНК let - 7. ER 16 понижающе регулирует miR - 221/222, что подавляет трансляцию ER , miR - 29 abc блокирует трансляцию Klf 4, а miR - 141 блокирует трансляцию как Stat 5, так и PR . Пролактин связывает рецептор пролактина ( PRLR ) и блокирует экспрессию транскрипционного фактора BCL 6, что подавляет прогестинозависимую индукцию СК5 [ 12 ] . А ндрогены определяют торможение роста МЖ во время пубертатного и постпубертатного периода. Они действуют в качестве ингибиторов экспрессии ER - α и снижают пролиферацию миоэпителиальных клеток. Из - за с воего ингибиционного воздействия на стромальные клетки недостаток андрогенов стимулирует развитие МЖ [ 21 ] . 1.4. Молекулярные маркеры фиброаденоматоза и рака молочной железы Наиболее значимыми маркерами РМЖ являю тся ER - α , ER - β 1 , PR . Также маркерами РМЖ являются PTEN , K i - 67, рецептор 2 эпидермального фактора роста человека ( HER 2 ) . 1.4.1. Рецептор - альфа к эстрогену ER - α При РМЖ экспрессия ER - α , как и экспрессия PR , находится среди самых главных диагностических и прогностических факторов. Уров ень экспрессии биомаркера ER - α , как и PR , играют критическую роль в терапии и прогнози ровании опухолей МЖ [ 22 ] . Для клинического использования важно определение экспрессии ER - α с помощью анализа иммуногистохимии ( ИГХ ) , которое регулярно применяется для получения прогноза и оценки пациентов, для которых эндокринная терапия принесет максимальную пользу [ 1 9 ] . Активность ER - α зависит от скоординированной активности лигандной связи, посттрансляционных модификаций (ПТМ) и, что важно, взаимодействия с их партнерскими протеинами, которые называются «корегуляторы». Благодаря тому, что было доказано, что корегуляторы критически важны для транскрипционной активности ER - α , и большинство РМЖ являются ER - α пози тивными, возрастающий интерес к этой области привел к идентификации большого числа корегуляторов [5] . 17 Данный рецептор регулируе т транскрипцию разнообразного множества целевых генов во время развития и в ответ на специфические физиологические и патологические сигналы [6] . Накапливающиеся свидетельства заставляют думать, что ER - α набираются преимущественно в энхансерных областях целевых генов после стимуляции стероидного гормона 17 b - эстрадиола ( Е2 ) . Данные энхансерные элементы модулируют экспрессию целевых генов с помощью формирования хроматиновых петель . Это подтверждается тем фактом, что истощение ER - α приводит к транскрипционной репрессии и потере хроматиновых петель, тем самым поддерживая представление о том, что E R - α на самом деле участвует в образовании хроматиновых петель в клетках РМЖ . Б езлигандные ER - α также связываются с большим числом хроматиновых сайтов в клетках РМЖ и такое связывание специфически относитс я к генам с функциями развития [10 ] . ER - α может такж е косвенно влиять на генную транскрипцию через свое физическое взаимодействие с другими транскрипционными факторами, такими как белок - активатор 1 ( AP 1), SP 1, ядерный фактор - κ B ( NF - κ B ) и E 2 F 1 [ 14 ] . До сих пор бытует несколько противоречивых взглядов относительно возможности прогнозировать исход РМЖ по статусу ER - α . Сверхэкспрессия ER - α ассоциируется с высоким риском развития рака. Молекулярный механизм, посредством которого ER - α порождают злокачестве нные заболевания в МЖ человека, связан с аберрантной экспрессией ER - α и с конститутивной активацией ER - α - позитивного деления клеток. Высокое процентное содержание клеток, экспрессирующих ER - α , коррелируется с высоким риском развития РМЖ. ER - α может быть по лезен в качестве маркера определения риска развития РМЖ [35 ] . Ядерная экспрессия ER - α в нормальной тк ани человеческой МЖ также поддерживается и в злокачественной ткани. В нормальной ткани МЖ уровни ER - α увеличиваются с возрастом без связи с РМЖ. ER - α , как и PR , играе т важную роль в развитии МЖ , и его высокий или низкий уровень обнаруживае тся в нормальной ткани МЖ в физиологических условиях [ 21 ] . 18 1.4.2. Рецептор - бета 1 к эстрогену ER - β 1 ER - β 1 – одна из изоформ протеина MI - ER 1 . MI - ER 1 является вновь открытым транскрипционным регулятором, играющим критическую роль в эмбриональном развитии и дифференциально экспрессируемым при карциноме МЖ . Существуют две изоформы MI - ER 1 : ER - α 1 и ER - β 1 , который отличается от ER - α 1 по последовательности своих С - концов [ 30 ] . 1.4.3. Рецептор ы к прогестерону PR PR может активировать транскрипционный процесс, действующий как при нормальном размножении клеток МЖ, так и при развитии РМЖ [27] . Более того, экспрессия PR является важным маркером люминального РМЖ , ассоциируемого с благоприятным прогнозом, и свидетельствует о лучшем ответе на эндокринную терапию [16] . PR активирует последовательность , ассоциируемую с размножением клеток МЖ и РМЖ , либо непосредственно связыв аясь с ДНК с помощью действующих в цис - положении ответных прогестерону элементов (ОПЭ), либо опосредованно связываясь с другими связанными с ДНК транскрипционными факторами . Кроме свойств транскрипционного фактора PR может мигрировать за пределы ядра и быть посредником в быстрой прогестероноиндуцированной активации серии альтернативных, негеномных белковых фосфорилированных сигнальных каскадов . Далее, в свою очередь , нег еномная активация посредством PR приводит к фосфорилированию PR , которое способствует связыванию с его ОПЭ или другими элементами на целевой ДНК посредством связывающих взаимодействий с другими транскрипционными факторами [ 1 9 ] . Блокада оси PR является новой, но непроверенной стратегией для профилактики РМЖ [ 17 ] . Сигнализация PR стимулирует пролиферацию эпителиальных клеток посредством неизвестного механизма в предраковых очагах и опухолях МЖ . Однако первичные опухоли с негативной экспрессией PR ассоциировались с менее дифференцированным и более инвазивным фенотипом и худшим про г нозом, чем у экспрессирующих PR [26] . 19 Отсутствие PR , как и ER - α , определяется как отрицательный РМЖ ( TNBC ), рассматриваемый как агрессивное заболевание, поражающее молодых пациентов, и характеризующееся ранним рецидивом, специфическим метастатическим поражением внутренних органов и неблагоприятным прогнозом [ 22 ] . Ядерная экспрессия PR в нормальной тк ани человеческой МЖ также поддерживается и в злокачественной ткани. PR , как и ER - α , действует в качестве модулятора клеточной активности в нормальной тк ани человеческой МЖ. У ров ень PR снижается в нормальной ткани МЖ во время беременности и лактации [ 21 ] . 1.4.4. PTEN CSC являются небольшим подтипом всех раковых клеток, стимулирующих инициацию, прогрессирование и метастазирование опухоли. С игнальный путь AhR / CYP 1 A 1 управляет пролиферацией CSC МЖ , развитием, самообновлением и хеморезистентностью через торможение PTEN и активацию путей β - катенина и Akt . PTEN критически важен для сохранения CSC , причем потеря PTEN приводит к активации Akt с последующим развитием CSC и онкогенезу МЖ [ 4 ] . 1.4.5. Ki - 67 Антиген Ki - 67 это ядерный протеин, который активно экспрессируется в делящихся клетках, но не после митоза [2] . Индекс пролиферации ( PI ) внутриопухолевого Ki - 67 статистически ассоциировался с характеристиками повышенной агрессивности, такими как гистологическая форма опухоли, ядерный полиморфизм и вовлеченность лимфоузлов [11] . Высокие внутриопухолевые Ki - 67 статистически ассоциировались с более короткой выживаем остью [15] . Маркировка Ki - 67 была обнаружена в широком ряде опухоле й у людей [20] . 20 ИГХ исследования с антителом Ki - 67 наво дят на мысль, что оно является полезными прогностическим показателем для безрецидивного периода у пац иентов с Р МЖ [ 19 ] . Настоящие результаты показали позитивную и статистически значимую корреляцию между опухолевым Ki - 67 и Ki - 67 в соседних неопухолевых МЖ в доброкачественных и злокачественных опухолях. Интересно отметить, что в злокачественных опухолях высокое содержание Ki - 67 в со седних неопухолевых МЖ проявляло статистическую ассоциированность с клиникопатологическими свойствами опухолевой агрессивности. Факторы роста, производимые опухолью, могли воздействовать на соседнюю неопухолевую МЖ паракринно, содействуя созданию вы сокопролиферативной опухолевой микросреды [ 19 ] . Позитивность к Ki - 67 сильно связана со стадией опухоли. Ki - 67 считается важным прогностическим параметром при оценке РМЖ и сильно коррелирует со стадией опухоли [ 21 ] . 1.4.6. Рецептор 2 эпидермального фактора роста человека HER 2 HER 2 ( ErbB 2) – молекулярный биомаркер, синергетически индуцирует (стимулирует) карценогенез МЖ [ 14 ] . Д анные показывают, что для образования опухолей МЖ и для сильной индуцируемой HER 2 пролиферации в модели 3 D злокачественной трансформации необходим транспортер глюкозы GLUT 1 [13] . Данное исследование указывает, что ранние опухолевые клетки не приобрели способность использовать для роста альтернативные субстраты, и подчеркивает потенциальную возможность сфокусир оваться на ограничении глюкозы как на пр офилактической стратегии РМЖ [18] . Такой активированный онкоген, как HER 2 , может управлять экспрессией GLUT 1 даже в условиях нормального содержания кислорода [24] . Исследования также подтверждают, что ограничение пог лощения глюкозы тормозит канцерогенез МЖ в HER 2 - индуцируемых моделях, и поддерживают 21 развитие пр офилактических стратегий РМЖ на основе прицельного воздействия на метаболизм глюкозы [ 34 ] . Экспрессию HER 2 находят как в злокачественной, так и незлокачественной ткани МЖ. В злокачественных образцах уровни экспрессии HER 2 выше. HER 2 экспрессируется в половом, желудочно - кишечном трактах и дыхательном пути. На эпителиальных клетках HER 2 проявляет модель мембранной экспрессии [25] . HER 2 ассоциируется с агрессивными типами РМЖ и его сверхэкспрессия является признаком неблагоприятного прогноза [31] . ИГХ оценка HER 2 играет важную роль как в диагностике, так и прогнозировании исхода у пациентов с диагнозом РМЖ; таким образом гарантируется применение соотв етственной терапии. В многочисленных исследованиях содержится предположение, что в рамках одного молекулярного подтипа РМЖ может существовать разнородность. Так, например, обстоит дело с HER 2 - позитивными опухолями, экспрессия которого варьируется по статус у в первичных и метастатических опухолях [32] . Онкопротеин HER 2 меньше экспрессируется в нормальных образцах человеческой МЖ, но сильно экспрессируется при некоторых злокачественных патологиях МЖ. В нормальных условиях уровни HER 2 значительно выше в фетальной ткани по сравнению с нормальной зрелой тканью . Несмотря на агрессивный фенотип HER 2 - позитивных Р МЖ исследования показали, что опухоли МЖ с нормальной экспрессией HER 2 могут обладать схожим агрессивным по ведением [ 21 ] . 22 Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОД Ы ИССЛЕДОВАНИЯ Аутопсийный материал МЖ женщин среднего возраста (35 - 45 лет) был исследован в НИИ АГиР им. Д.О. Отта . В результате отбора по данным патологоанатомического заключения в исследование был а включен а 21 пациент к а . По заключению в медицинской карте в се пациентки были разделены н а 5 групп: 1 – контроль , 2 – прол иферативный ФАМ , 3 – непрол иферативный ФАМ , 4 – пролиферативная раковая опухоль, 5 – непролиферативная раковая опухоль . 2.1. Гистологический метод Окраска гематокс илин - эозином включает в себя использование основного красителя гематоксилина, окрашивающего базофильные клеточные структуры синим цветом, и спиртового кислого красителя эозина, окрашивающего эозинофильные структуры клетки красно - розовым цветом. Базофильные структуры с одержат нуклеиновые кислоты (клеточное ядро, рибосомы) . Эозинофильные структуры включают в себя внутри - и внеклеточные белки. Цитоплазма также является эозинофильной средой. Протокол окрас ки парафиновых срезов ткани МЖ гематоксилин - эозином: 1. О пустить стекла на 1 5 минут в раствор гематоксилина. 2. П ромыть стекла в теплой воде 2 раза, оставить на 10 минут . 3. О пустить стекла на 10 секунд в эозин. 4. П ромыть стекла в воде . 5. В ыложить стекла на планшет . 6. П оместить стекла в термостат на 10 минут. 2.2. Иммуногистохимический метод Для изучения экспрессии ER - α , ER - β 1 , PR в ткани МЖ был испо льзован метод ИГХ . Протокол ИГХ исследования ткани МЖ: 1. Поместить стекла в термостат на 10 минут, t=60°C . 2. Помести ть стекла в ксилол на 15 минут ( депарафинизация ). 23 3. Поместить стекла в спирты восходящей концентрации от 70% до 96% (в каждый спирт п о 10 минут, дегидратация ). 4. Приготовить цитратный буфер. Реактивы: 1 л дистиллированной воды, 2.94 г цитрата натрия . 1) Смешать реактивы в колбе, поставленной на магнитную мешалку . 2) Довести pH до 6, титр уя лимонной кислотой . 5. Стекла после спиртов 2 раза промыть дистиллированной водой, затем поместить их в скороварку с цитратным буфером на 20 минут (зат ем дать настояться 15 - 20 минут ; демаскировка антигенов ). 6. Приготовить 3 емкости: a. С 200 мл дистиллированной воды . b. С 200 мл перекиси водорода (20 мл пергидроля + 180 мл дистиллированной воды) . c. С 200 мл wash buffer (WB) – промывочный буфер . 7. После демаскировки антигенов стекла промыть в дистиллированной воде, затем по местить их в WB на 10 минут . 8. Промыть в Н 2 О, поместить в Н 2 О 2 на 10 минут . 9. Промыть; в WB на 10 минут . 10. О бвести срезы гидрофобным карандашом . 11. Нанести на срезы первичные антитела (см. Таблицу 1) . 12. После нанесения первичных антител стекла поместить во влажную камеру . 13. Инкуб ировать при t=4°C в течение 24 ча сов. 14. 2 раза промыть в дистиллированной Н 2 О . 15. Поместить в WB на 10 минут . 16. Нанести на стекла вторичные антитела , конъюгированные с пероксидазой . 17. Поместить стекла во влажную камеру . 18. Сушить 30 минут при комнатной температуре . 24 19. 2 раза промыть в дистиллированной Н 2 О . 20. Пометить в WB на 10 минут . 21. Развести хромоген (1:50) . 22. Нанести хромоген на срезы, под микроскопом оценить окраску . 23. 2 раза промыть в дистиллированной Н 2 О . 24. Поместить в гематоксилин (на 2 - 3 секунды) . 25. Промыть в дистиллированной Н 2 О . 26. Просушить при t=60°C . Таб лица 1. Первичные антитела, испо льзуемые в ИГХ исследовании Антиген Используемые антитела Разведение Производитель Вторичные антитела Рецепторы - альфа к эстрогену ( ER - α ) Кроличьи поликлональные антитела к ER - α 1:50 Abcam Alexa Fluor 647 (1:1000), Abcam Рецепторы - бета 1 к эстрогену ( ER - β 1 ) Мышиные моноклональные антитела к ER - β 1 1:50 Abcam Alexa Fluor 647 (1:1000), Abcam Рецепторы к прогестерону ( PR ) Мышиные моноклональные антитела к PR 1: 50 Dako Alexa Fluor 647 (1:1000), Abcam 2.3. Морфометрия Изучение препаратов эндометрия проводилось на микроскопе Nikon Ѐ400 (Япония) при увеличении 40 0. Для количествен ной оценки ИГХ реакции получали микрофотографии с использованием программного обеспечения «АСТ - 1», версия 2.12 . Для оценки ре зультатов ИГХ окрашивания проводили морфометрическое исследование микрофотографий с использованием 25 программного обеспечения ВидеоТест Морфология 5.2. (Россия ). Оценка результатов пров одилась по показателям относительной площади экспрессии (ОПЭ). На каждом препарате исс ледовали 4 поля зрения при увеличении 400. Относительную п лощадь экспрессии ( ОПЭ, %) рас с читывали как отношение площади, занимаемой иммунопозитивными клетками, к общей площади поля зрения. Этот параметр характеризует количество клеток, в которых экспрессир уется исследуемый маркер. Оптическую плотность (ОП) измеряли в условных единицах. Измерение оптической плотности позволяет оценить интенсивность экспрессии маркера в каждой клетке и вычислить среднее значение для среза в целом. 2.4. Статистический анализ д анных Статистическая обработка полученных результатов проводилась с использованием методов описательной и непараметрической статистики. Методы описательной статистики включали в себя оценку среднего арифметического значения, стандартного отклонения от сред него значения и доверительного интервала. Критический уровень достоверности нулевой статистической гипотезы (об отсутствии значимых различий) принимался равным 0,05. Для о ценки межгрупповых различий значений признаков использовался непараметрический рангов ый U - критери й Манна - Уитни . Данный критерий применяется, если исследуемые выборки малого объема, и если про их распределение ничего не известно. Этот метод определяет, достаточно ли мала зона перекрещивающихся значений между двумя рядами (ранжированным рядо м значений параметра в первой выборке и таким же во второй выборке). Чем меньше значение критерия, тем вероятнее, что различия между значениями параметра в выборках достоверны. U - к ритерий Манна - Уитни вычисляется по следующей формуле: , где: n 1 , n 2 – количество элементов в первой и второй выборке соответственно ; T x – ранговая сумма ; n x – количество элементов в выборке, соответствующее большей ранговой 26 сумме. 27 Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ 3.1. Экспрессия рецепторов - альфа к эстрогену в ткани молочной железы у женщин с пролиферативным и непролиферативным фиброаденоматозом и раком молочной железы Экспрессия ER - α выявлялась в основном в железах ткани МЖ (ядерная локализация) (рис. 2). В группе « контроль » сред н ие значени я относительной площади экспрессии и оптической плотности ER - α составили соответственно 29,13 + 3,7 3 % и 0,08 + 0,01 у.е. В группе « пролиферативн ая раковая опухол ь» средние значения относительной площади и оптической плотности ER - α составили соответственно 28,70 + 4,5 7 % и 0,16 + 0,02 у.е. В группе « непролиферативн ая опухоль» средние значения относительной площади и оптической плотности ER - α составили соответственно 18,93 + 2,2 8 % и 0,09 + 0,02 у.е. В группе « пролиферативн ый ФАМ » средние значения относительной площади и оптической плотности ER - α составили со о тветственно 18,42 + 1,1 1 % и 0,15 + 0,03 у.е. В группе « непролиферативн ый ФАМ » средние значения относительной площади и оптической плотности ER - α составили соответственно 17,27 + 3,5 5 % и 0,14 + 0,01 у.е . 28 А Б В Г Д Рис.2 . Экспрессия ER - α в ткани МЖ, ИГХ , х 4 0 : А – МЖ группы « контроль » ; Б – МЖ группы « пролиферативн ая раковая опухоль» ; В – МЖ группы « непролиферативн ая раковая опухоль» ; Г – МЖ группы « пролиферативн ый ФАМ » ; Д – МЖ групп а « непролиферативн ый ФАМ ». 29 Рис. 3 . Средние значения относительной площади экспрессии ER - α в ткани МЖ исследуемых групп. * - р<0,05 по сравнению с группой « контроль » Рис.4 . Средние значения оптической плотности ER - α в ткани МЖ исследуемых групп. * - р< 0,05 по сравнению с группой « контроль » ** - р<0,05 по сравнению с группой « непролиферативная раковая опухоль » * 0 5 10 15 20 25 30 35 Относительная площадь экспрессии, % Контроль Пролиферативная опухоль Непролиферативная опухоль Пролиферативный ФАМ Непролиферативный ФАМ * * 0 0,05 0,1 0,15 0,2 0,25 Оптическая плотность, у.е. Контроль Пролиферативная опухоль Непролиферативная опухоль Пролиферативный ФАМ Непролиферативный ФАМ * * * ** 30 Относительная площадь экспрессии ER - α в группе «непролиферативная равковая опухоль» в 1,5 раз а ниже, чем в группе «контроль». Относительная площадь экспрессии ER - α в группе «пролиферативный ФАМ» в 1,6 раз а ниже, чем в группе «контроль». Относительная площадь экспрессии ER - α в группе «непролиферативный ФАМ» в 1,7 раза ниже, чем в группе « контроль » . Оптическая плотность ER - α в группе «пролиферативная раковая опухоль» в 2 раза превышает оптическую плотность ER - α в группе « контроль » . Оптическая плотность ER - α в группе «пролиферативный ФАМ » в 1,8 раз а превышает оптическую плотность ER - α в группе « контрол ь » . Оптическая плотность ER - α в груп пе «непролиферативный ФАМ » в 1,7 раз а превышает оптическую плотность ER - α в группе « контроль » . Оптическая плотность ER - α в групп е «пролиферативная раковая опухоль» в 1,8 раз а превышает оптическую плотность ER - α в группе «непролиферативная раковая опухоль» . ( Рис. 3, 4 ). 3.2. Экспрессия рецепторов - бета 1 к эстрогену в ткани молочной железы у женщин с пролиферативным и непролиферативным фиброаденоматозом и раком молочной железы Экспрессия ER - β 1 выявлялась в железах и строме ткани МЖ (ядерная локализация ) (рис. 5 ). В группе « контроль » среднее значение относительной площади экспрессии и оптической плотности ER - β 1 составили соответственно 28 , 54 + 4,47 % и 0, 10 + 0,03 у.е. В группе «пролиферативная раковая опухоль» среднее значение относительной площади и оптической плотности ER - β 1 составили соотве тственно 8 , 33 + 3,09 % и 0,1 38 + 0,004 у.е. В группе «непролиферативная раковая опухоль» среднее значение относительной площади и оптической плотн ости ER - β 1 составили соответст венно 36 , 40 + 4 ,73 % и 0,0 84 + 0,013 у.е. В группе «пролиферативный ФАМ » среднее значение относительной площади и оптической плотности ER - β 1 составили соответственно 17 ,42 + 4,69 % и 0,1 19 + 0,023 у.е. В группе «непролиферативный ФАМ » среднее значение относительной площади и оптической плотн ости ER - β 1 составили соответственно 21 , 89 + 4 ,5 0 % и 0,1 50 + 0,0 26 у.е . 31 А Б В Г Д Рис.5 . Экспрессия ER - β 1 в ткани МЖ, ИГХ, х 40 : А – МЖ группы « контроль » ; Б – МЖ группы «пролиферативная раковая опухоль» ; В – МЖ группы «непролиферативная раковая опухоль» ; Г – МЖ группы «пролиферативный ФАМ » ; Д – МЖ группы «непролиферативный ФАМ » . 32 Рис. 6 . Средние значения относительной площади экспрессии ER - β 1 в ткани МЖ исследуемых групп. * - р<0,05 по сравнению с исследуемой группой « контроль » ** - р<0,05 по сравнению с исследуемой группой « непролиферативная раковая опухоль » Рис.7 . Средние значения оптической плотности ER - β 1 в ткани МЖ исследуемых групп. * - р< 0,05 по сравнению с исследуемой группой « контроль » ** - р<0,05 по сравнению с исследуемой группой « непролиферативная раковая опухоль » 0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 Относительная площадь экспрессии, % Контроль Пролиферативная опухоль Непролиферативная опухоль Пролиферативный ФАМ Непролиферативный ФАМ * ** * 0 0,05 0,1 0,15 0,2 Оптическая плотность, у.е . Контроль Пролиферативная опухоль Непролиферативная опухоль Пролиферативный ФАМ Непролиферативный ФАМ * ** ** 33 Относительная площадь экспрессии ER - β 1 в группе «пролиферативная раковая опухоль» в 3,4 раз а ниже, чем в группе « контроль » . Относительная площадь экспрессии ER - β 1 в группе «пролиферативный ФАМ» в 1,6 раз а ниже, чем в группе «контроль». Относительная площадь экспрессии ER - β 1 в группе «пролиферативная раковая опухоль» в 4,4 раз а ниже , чем в группе «непролиферативная раковая опухоль» . Оптическая плотность ER - β 1 в группе « пролиф еративная раковая опухоль» в 1,4 раз а превышает оптическую плотность ER - β 1 в группе « контроль » . Оптическая пло тность ER - β 1 в группе «пролиферативная раковая опухоль» в 1,6 раз а превышает оптиче скую плотность ER - β 1 в группе «непролиферативная раковая опухоль» . Оптическая плотность ER - β 1 в группе «непролиферативный ФАМ» в 1,6 раза превышает оптическую плотность ER - β 1 в группе «непролиферативная раковая опухоль». ( Рис. 6, 7 ). 3.3. Экспрессия рецепторов к прогестерону в ткани молочной железы у женщин с пролиферативным и непролиферативным фиброаденоматозом и раком молочной железы Экспрессия PR выявлялась в основном в железах и в меньшей степени в строме ткани МЖ (ядерная локализация ) (рис. 8 ). В группе « контроль » средни е значени я относительной площади экспрессии и оптической плотности PR составили соответственно 20 , 09 + 4,93 % и 0, 10 0 + 0,0 08 у.е. В группе «пролиферативная раковая опухоль» средн и е значени я относительной площади и оптической плотности PR составили соотве тственно 16 , 51 + 0,13 % и 0, 204 + 0,043 у.е. В группе «непролиферативная раковая опухоль» средн и е значени я относительной площади и оптической плотн ости PR составили соответственно 16 , 55 + 4 ,11 % и 0, 116 + 0,018 у.е. В группе «пролиферативный ФАМ » средн и е значени я относительной площади и оптической плотности PR составили соответственно 18 , 16 + 4,22 % и 0,1 52 + 0,043 у.е. В группе «непролиферативный ФАМ » средн и е значени я относительной площади и оптической плот н ости PR составили соответственно 12 , 65 + 4 ,97 % и 0,1 82 + 0,026 у.е . 34 Достоверность различий не выявлена между пока зателями относительной площади, но выявлена между показателями оптической плотности в исследуемых группах. 35 А Б В Г Д Рис. 8 . Экспрессия PR в ткани МЖ, ИГХ, х 40 : А – МЖ группы « контроль » ; Б – МЖ группы «пролиферативная раковая опухоль» ; В – МЖ группы «непролиферативная раковая опухоль» ; Г – МЖ группы «пролиферативный ФАМ » ; Д – МЖ группы «непролиферативный ФАМ » . 36 Рис. 9 . Средние значения относительной площади экспрессии PR в ткани МЖ исследуемых групп ( достоверно не различаются). Рис.10 . Средние значения оптической плотности PR в ткани МЖ исследуемых групп. * - р<0,05 по сравнению с исследуе мой группой « контроль » ** - р <0,05 по сравнению с исследуемой группой « непролиферативная раковая опухоль » 0 5 10 15 20 25 30 Относительная площадь экспрессии, % Контроль Пролиферативная опухоль Непролиферативная опухоль Пролиферативный ФАМ Непролиферативный ФАМ 0 0,05 0,1 0,15 0,2 0,25 0,3 Оптическая плотность, у.е . Контроль Пролиферативная опухоль Непролиферативная опухоль Пролиферативный ФАМ Непролиферативный ФАМ * * ** ** 37 Оптическая плотность PR в группе «пролиферативная раковая опухоль» в 2 раз а превышает оптическую плотность PR в группе « контроль » . Оптическая плотность PR в группе « непролиферат ив ный ФАМ » в 1,8 раз а превышает оптическую плотность PR в группе « контроль » . Оптическая плотность PR в группе «пролиферативная раковая опухоль» в 1,8 раз а превышает оптическую плотность PR в группе «непролиферативная раковая опухоль» . Оптическая плотность PR в группе « непролифер ативный ФАМ » в 1,6 раз а превышает оптическую плотность PR в группе «непролиферативная раковая опухоль» . ( Рис. 9, 10 ). 38 ЗАКЛЮЧЕНИЕ В данной работе была изучена роль экспрессии следующих молекул: рецепторов - альфа к эстрогену ER - α , рецепторов - бета 1 к эстрогену ER - β 1, рецепторов к прогестерону PR в ткани МЖ у женщин с ФАМ и РМЖ по сравнению с нормой. Было показано, что экспрессия данных сигнальных молекул достоверно различна в зависимости от патологии. Показатели экспрессии ER - α достоверно ниже по площади у женщин с непролиферативной раковой опухолью, пролиферативным ФАМ, непролиферативным ФАМ , но более выше в одной клетке у женщин с пролиферативной раковой опухолью, пролиферативным ФАМ, непролиферативны м ФАМ по сравнению с нормальным распределением ER - α в ткани МЖ и у женщин с пролиферативной раковой опухолью по сравнению с непролиферативной раковой опухолью. Показатели экспрессии ER - β 1 достоверно ниже по площади у женщин с пролиферативной раковой опухолью, пролиферативным ФАМ по сравнению с нормальным распределением ER - β 1 в ткани МЖ, у женщин с пролиферативной раковой опухолью по сравнению с непролиферативной рак овой опухолью, но более выше в одной клетке у женщин с пролиферативной раковой опухолью по сравнению с нормальным распределением ER - β 1 в ткани МЖ и у женщин с пролиферативной раковой опухолью, непролиферативным ФАМ по сравнению с непролиферативной раковой опухолью. Показатели э кспрессии PR достоверно выше в одной клетке у женщин с пролиферативной раковой опухолью, непролиферативным ФАМ по сравнению с нормальным распределением PR в ткани МЖ и непролиферативной раковой опухолью. Таким образом, маркеры ER - α и ER - β 1 могут являться информативными для дифференциальной диагностики новообразований молочной железы. 39 ВЫ ВОДЫ 1. П л ощадь экспр ессии ER - α в ткани молочной железы в группе «непролиферативная раковая опухоль» была в 1,5 раз а ниже , чем в группе «пролиферативный ФАМ» и в 1,6 раза ниже, чем в группе «непролиферативный ФАМ» и в 1,7 раза ниже по срав нению с контролем . 2. П лощадь экспрессии ER - β 1 в ткани молочной железы в группе «пролиферативная раковая опухоль» была в 3,4 раза ниже, чем в группе «пролиферативный ФАМ» , в 1,6 раза ниже по сравнению с контролем и групп ой «пролиферативная раковая опухоль» и в 4,4 раза ниже по сравнению с группой «непролиферативная раковая опухоль». 3. Площадь экспрессии PR во всех исследуемых группах достоверно не различалась. 40 СПИСОК ЛИ ТЕРАТУРЫ 1. Пальцев М. А., Кветной И. М. Руководство по нейроиммуноэндокринологии. М .: Медицина . 2013. С . 752. 2. Ács B., Zámbó V., Vízkeleti L., Szász A., Madaras L. Ki - 67 as a controversial predictive and prognostic marker in breast cancer patients trea ted with neoadjuvant chemotherapy // Diagnostic Pathology. 2017. 12(1). 1 - 20. L. Treatment Challenges and Survival Analysis of Human Epidermal Growth Factor Receptor 2 - positive Breast Cancer in Real World // Indian Journal of Medical and Paediatric Oncology : . 38(1). Р . 22 - 27. 4. Al - Dhfyan A., Alhoshani A., Korashy H. Aryl hydrocarbon receptor/cytochrome P450 1A1 pathway mediates breast cancer stem cells expansion through PTEN inhibition and β - Catenin and Akt activation// Molecular Cancer. 2017 Jan 19; 16(1). P. 14. 5. Bai J., Chen M., Wei X., Li Y., Lin H. The zinc - finger transcriptional factor Slug transcriptionally downregulates ER α by recruiting lysine - human breast cancer // Oncogenesis. 2017. Р . 1 - 11 . 6. - Magnaval, Navarro M., Touriol C., Courtade M. Api5 a new cofactor of estrogen receptor alpha involved in breast cancer outcome // Oncotarget. 2017. Р 1 - 20. 7. Bramanandam M., Venkata S.,Vijay G. Estrogen receptor coregulators and pioneer factors: the orchestrators of mammary gland cell fate and development// Front Cell Dev Biology 2014 Aug; P. 2 - 34. 8. Burks H., Pashos N., Martin E., Mclachlan J., Bunnell B., Burow M. Endocrine disruptors and the tumor microenvironment: A new paradigm in breast cancer biology//Molecular Cell Endocrinol ogy . 2016 Dec; 22; P. 1 - 17. 9. Carvalho M., Pires I., Prada J., Lobo L., Queiroga F. Ki - 67 and PCNA Expression in Canine Mammary Tumors and Adjacent Nonneoplastic Mammary Glands: Prognostic Impact by a Multivariate Survival Analysis// Veterinary Pathology 2016 41 Nov; 53(6). P. 1138 - 1146. 10. Collins D., Jacob W., Cejalvo J., Ceppi M., James I. Direct estrogen receptor in ER+ breast cancer // PLoS One. 2017. 12(5). Р . 1 - 14. 11. Donato J., Frazão R. Interactions between prolactin and kisspeptin to control Р . 587 - 595. 12. Finlay - Schultz J., Sartorius C. Steroid hormones, steroid receptors, and breast cancer stem cells// Journal of Mammary Gland Biology Neoplasia. 2015 Jun; 20 (1 - 2). P. 39 - 50. 13. Haghnavaz N., Asghari F., Elieh Ali Komi D., Shanehbandi D., Baradaran B. HER 2 positivity may confer resistance to therapy with paclitaxel in breast cancer cell lines // Artificial Cells, Nanomedicine, and Biotechnology. 2017 Р . 1 - 6. 14 . Ikink G., Boer M., Bakker E., Hilkens J. IRS4 induces mammary tumorigenesis and confers resista nce to HER2 - - pathway hyperactivation// Nature Communication 2016 Nov 23; P: 7:13567. 15. Inari H., Suganuma N., Kawachi K., Yoshida T., Yamanaka T. Clinicopathological and prognostic significance of Ki - 67 immun ohistochemical Breast Cancer. 2017. Р . 1 - 8. 16. Knutson T., Truong T., Ma S., Brady N., Sullivan M. Posttranslationally modified progesterone receptors direct ligand - spec ific expression of breast cancer stem cell - associated gene programs // Journal of Hematology & Oncology. 2017. 10(1):89. 1 - 24. 17 . Lee O., Choi MR., Christov K., Ivancic D., Khan S. Progesterone receptor antagonism inhibits progestogen - related carcinogenes is and suppresses tumor cell - 317. 18. Lewis Phillips G., Nishimura M., Lacap J., Kharbanda S., Mai E. Trastuzumab uptake and its relation to efficacy in an animal model of HER2 - positive breast cancer Р . 1 - 11. 19 . Lou P., Li C., Shi L., Xia TS., Zhou W. RNPC1 enhances progesterone receptor 42 functions by regulating its mRNA stability in breast cancer//Oncotarget. 2017 Mar 7; 8 (10). P. 16387 - 16400. 20. Mannell A. The role of Ki - 67 in breast cancer // S Afr J Surg. 2016. 54(2) Р . 10 - 13 . 21 . Margan M., Jitariu A., Cimpean A., Nica C., Raica M. Molecular Portrait of the Normal Human Breast Tissue and Its Influence on Breast Carcinogenesis. Journal of Breast Cancer. 2016 Jun; 19 (2). P. 99 - 111. 22 . Morales A ., Morimoto S ., Vilchis F ., Taniyama N ., Bautista C . Mole cular - 1 and other biomarkers in infiltrating canalicular carcinoma of the breast// 201 6 Oct; 12(4) P. 2720 - 2727. 23. Muenst S., Mechera R., Däster S., Piscuoglio S., Ng C. Pregnancy at early age is associated with a reduction of progesterone - responsive cells and epithelial Wnt Р . 2 2353 - 22360. 24. Nishimura R., Toh U., Tanaka M., Saimura M., Okumura Y. Role of HER2 - Related Biomarkers (HER2, p95HER2, HER3, PTEN, and PIK3CA) in the Efficacy of Lapatinib plus Capecitabine in HER2 - Positive Advanced Breast Cancer Refractory to Trastuzumab // Oncology. 2017. 93(1). Р . 1 - 11. 25. Rainone P., Riva B., Belloli S., Sudati F., Ripamonti M. Development of 99mTc - - positive breast cancer // International Journal of Nanomedicine. 2017. Р . 3447 - 3461. 26. Rojas P., May M., Sequeira G., Elia A., Alvarez M. Progesterone Receptor Isoform Ratio: A Breast Cancer Prognostic and Predictive Factor for Antiprogestin Responsiveness // Journal of the National Cancer Institute. 2017. 109(7). Р . 1 - 10. 27 . Sandra L., Grimm, Sean M., Hartig., Dean P., Edwards. Progesterone Receptor Signaling Mechanisms // Journal of Molecular Biology ю . 2016. Р 1 - 8. 28. Speroni L., Voutilainen M., Mikkola M., Klager S., Schaeberle C. New insights phogenesis: differential effects of natural and environmental estrogens // Scientific Reports. 2017. Р . 1 - 7. 29. Tarulli G., Butler L., Tilley W., Hickey T. Bringing androgens up a NOTCH in 43 breast cancer // Endocrine - Related Cancer. 2014. 21(4) Р . 183 - 202 . 30. Thorne L., McCarthy P., Paterno G., Gillespie L. Protein expression of the transcriptional regulator MI - ER1 alpha in adult mouse tissues// Journal of Molecular Histology. 2008 Feb; 39(1). P. 15 - 24. 31. Ulaner G., Castillo R., Wills J., Gönen M., Goldman D. 18F - FDG - PET/CT for systemic staging of patients with newly diagnosed ER - positive and HER2 - positive breast cancer // European Journal of Nuclear Medicine and Molecular Imaging. 2017. 1 - 10. 32. Varga Z., Lebeau A., Bu H., Hartmann A., Penault - Llorca F. An international reproducibility study validating quantitative determination of ERBB2, ESR1, PGR, and MKI67 mRNA in breast cancer using MammaTyper // Breast Cancer Research. 2017. 19(1) Р . 1 - 13. 33. Walters K., Simanainen U., Gibson D. Androgen action in female reproductive physiology // Current Opinion in Endocrinology & Diabetes and Obesity. 2016. 23(3) Р . 291 - 29 6 . 34 . Wellberg E., Johnson S., Finlay - Schultz J., Lewis A., Terrell K. The glucose transporter GLUT1 is required for ErbB2 - induced ma mmary tumorigenesis// Breast Cancer Research 2016 Dec 20; 18(1) P. 131. 35. Yen M., Kan J., Hsieh C., Kuo P., Hou M. Association of long - chain acyl - status and its clinical signi ficance // Oncology Reports. 2017. Р . 3253 - 3260.

Приложенные файлы

  • pdf 36352412
    Размер файла: 2 MB Загрузок: 0

Добавить комментарий